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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】启动子缺失载体的构建
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暗星

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】启动子缺失载体的构建 已有5人参与

最近构建了启动子的缺失载体，但是转烟草之后GUS染色一直没有染出来，请教各位高手指点一下！
注：后来分析序列时，得知在GUS起始密码子上有还有一个ATG（启动子上的），但是并没有造成GUS的移码突变，只是可能会在GUS蛋白前面添加44个氨基酸，难道这样会造成染色失败吗？
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1楼 2010-10-24 10:08:03
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小林mxm

木虫 (正式写手)

刚健
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也想请教，哪位高人给指点指点啊！
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君子之道，譬如行远，必自迩：譬如登高，必自卑！
2楼2010-10-24 10:35:26
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):幸苦！ 2010-10-24 14:17:17
1、你确定得到了转基因植株吗？最好用GUS基因座探针做southern blot验证一下
2、 GUS staining 过程是否正确
3、 没有强启动子，可能导致GUS表达不强
赞一下(3人) 回复此楼
3楼2010-10-24 10:59:53
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):good！ 2010-10-24 14:17:28
GUS活性比较强的，一般融合蛋白对GUS部分的空间结构影响不大，也会有活性

而且仅仅有个ATG是不足以导致表达的。ATG只是翻译的起点，ATG之前没有起始转录必须的元件的话是不能引发转录的。mRNA都没有，哪来蛋白？得看ATG之前序列是什么才好分析
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4楼2010-10-24 13:58:19
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-10-24 13:58:19:
GUS活性比较强的，一般融合蛋白对GUS部分的空间结构影响不大，也会有活性

而且仅仅有个ATG是不足以导致表达的。ATG只是翻译的起点，ATG之前没有起始转录必须的元件的话是不能引发转录的。mRNA都没有，哪来蛋白 ...

正解，学习了
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5楼2010-10-24 19:15:54
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wxf8470

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-25 08:17:44
可能是载体出问题了。找一个可以做阳性对照的转基因烟草，排除染色是否有问题。
重新构建载体，把启动子上的ATG去掉。看能否同时转烟草和拟南芥。
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6楼2010-10-25 02:26:45
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18201723019

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
怎么做启动子缺失 ,分析预测了可能存在的顺式作用元件，可是确定不下来怎么做缺失，从哪里做，需要考虑哪些方面
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7楼2019-09-23 16:18:40
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