24小时热门版块排行榜    

查看: 2077  |  回复: 19

tian1203

银虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】片段转进去,提质粒酶切发现载体小了,想不明白

1200的片段,转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是,用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白,
就是说4800的载体+1200的目的基因,单酶切后理论上应该6000,为啥我的片段看着不到5000??质粒断了??

可以确定不是空载体,550的片段以前也出现过这种情况
DL-5000没问题,因为同时跑了DL-2000。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


2楼2010-12-16 10:11:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


手机拍的,质量不好。请教各位高手原因
3楼2010-12-16 10:13:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)



dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-16 12:57:44
tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:20:36
tian1203(金币+1):菌长的不多,其它的菌也是如此 2010-12-16 15:02:34
可以多挑几个阳性克隆,看看是不是都是这个情况
也可以尝试其他酶的双酶切,以至于3酶切,可以粗略估计哪一段缺失了,记得做个空载体对照;
4楼2010-12-16 12:40:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)


tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:20:52
我有一次连的酶切出来是目的基因莫名其妙短了1000bp,现在还不晓得原因~
5楼2010-12-16 13:04:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)


tian1203(金币+2):应该是最常见的,荧光素酶表达载体 2010-12-16 18:33:55
其实很想知道lz用的是什么载体,什么启动子
7楼2010-12-16 16:51:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainwander

铁杆木虫 (知名作家)


tian1203(金币+2): 2010-12-16 18:34:12
做实验很多时候都会莫名其妙的的现象
8楼2010-12-16 17:23:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


9楼2010-12-17 11:31:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


还是不知道原因
10楼2010-12-24 10:45:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
引用回帖:
Originally posted by tian1203 at 2010-12-16 09:52:40:
1200的片段,转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是,用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白,
就是说4800的载体+1200的目的基因, ...

楼主你空质粒酶切跑个对照看看,会不会是质粒上面某个位点发生突变,然后刚好被你的酶识别?
11楼2010-12-24 10:50:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可可猫

铜虫 (小有名气)


tian1203(金币+2):今天重做,还是同样的问题,郁闷 2010-12-26 14:28:32
我也跟lz遇到相同问题了

转化后发现重组质粒比空质粒大小还要小点
12楼2010-12-24 14:02:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sanmaoecho

金虫 (小有名气)


质粒有突变,多了一个酶切位点?可能性很小的吧
13楼2010-12-24 14:50:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaomu3811

金虫 (小有名气)


tian1203(金币+2):我的去测序,直接就失败 2010-12-26 14:29:00
引用回帖:
Originally posted by tian1203 at 2010-12-16 09:52:40:
1200的片段,转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是,用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白,
就是说4800的载体+1200的目的基因, ...

我也遇到了同样的情况,不知道是什么原因,我插入了一个约1800的片段,但是构建好的重组载体竟然比空载体小很多,但是我测序后证明了确实有我的目的片段插入。实在是解释不了,希望高手解答!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

14楼2010-12-24 16:54:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


一个月了,还是这样。到底是啥原因???
15楼2010-12-26 14:30:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


16楼2010-12-26 14:38:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


连接前后
17楼2010-12-26 14:38:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

frankstone

铜虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能质粒并没有减小,因为marker是线性DNA,和环状质粒的电泳行为有差异是很正常的。另外,酶切后上样量有点大,也会影响电泳的。如果想验证,可以用不同的酶切试试。供参考吧。
18楼2012-06-26 18:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caveolim1

新虫 (初入文坛)


19楼2015-09-25 21:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡水生烟

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by xiaomu3811 at 2010-12-24 16:54:36
我也遇到了同样的情况,不知道是什么原因,我插入了一个约1800的片段,但是构建好的重组载体竟然比空载体小很多,但是我测序后证明了确实有我的目的片段插入。实在是解释不了,希望高手解答!...

你好,我现在也遇到过了这种情况,就是重组质粒比空白对照小。请问你是怎么解决的那
20楼2015-11-20 21:40:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
2010-12-16 13:12   回复  
tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:21:07
相关版块跳转 我要订阅楼主 tian1203 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 氨基酸乙酯盐酸盐结晶 +3 Wen-1901243 2024-11-22 3/150 2024-11-23 08:08 by 591950582
[论文投稿] 投稿返修中,增加了作者,论文被拒了,还有办法补救嘛? +3 mollyzhang_2003 2024-11-22 4/200 2024-11-23 06:41 by conjurer1981
[考博] 读博 +9 珊瑶哇 2024-11-21 9/450 2024-11-22 23:29 by 20.24
[教师之家] 55岁女副教授,博士,该退休还是不退? +13 aizheteng 2024-11-22 13/650 2024-11-22 23:24 by 豫椒
[论文投稿] cell子刊为什么那么喜欢让作者转投到iScience啊 +6 26110097 2024-11-16 8/400 2024-11-22 23:23 by therotyonth
[基金申请] 长江学者评审开始了,有评审专家爆料被地毯式打招呼 +9 babu2015 2024-11-22 10/500 2024-11-22 22:00 by Howard28
[基金申请] 美国德州州立高校将禁止和中国合作科研 +5 babu2015 2024-11-20 5/250 2024-11-22 21:16 by jurkat.1640
[基金申请] 2024 年国社科后期资助项目到什么阶段了? +6 strong409 2024-11-17 8/400 2024-11-22 18:53 by bnugjsyh
[材料综合] 厚炭自支撑电极容易碎怎么解决 20+3 远方13579 2024-11-17 4/200 2024-11-22 16:52 by 红砖头
[教师之家] 咨询一下,去江西高校工作和发展前景怎么样 +10 akslis2024 2024-11-17 12/600 2024-11-22 14:05 by 杨杨杨咩
[论文投稿] 审稿人让补实验可以拒绝吗? 28+6 maxlhy 2024-11-20 13/650 2024-11-22 12:07 by suifengdao
[硕博家园] 博士毕业后将大论文拆分成小论文发表是否属于学术不端 +10 1362825417 2024-11-21 15/750 2024-11-22 11:58 by sunny300
[论文投稿] assigning reviewer一周就awaiting ECI decision是什么意思 +3 mollyzhang_2003 2024-11-21 5/250 2024-11-21 20:08 by mollyzhang_2003
[有机交流] 化合物合成 30+3 sz280115710 2024-11-18 3/150 2024-11-21 16:24 by xiaobenpu
[论文投稿] 这是必须要润色吗 +5 hfuucjh 2024-11-20 8/400 2024-11-21 14:43 by 投必得科研顾问
[论文投稿] ACS Catalysis投稿问题求助解答 10+5 葛旺鑫 2024-11-18 5/250 2024-11-21 14:43 by TopEdit
[论文投稿] under review 50+7 星辰2022 2024-11-19 13/650 2024-11-21 14:39 by TopEdit
[论文投稿] 为什么小修又是送审 +9 woshichuxuan 2024-11-16 13/650 2024-11-19 23:20 by jiangli
[有机交流] NBS溴代 100+3 风月客 2024-11-17 9/450 2024-11-19 18:15 by 风月客
[微米和纳米] 纳米分散 50+3 我是wink啊 2024-11-16 5/250 2024-11-19 09:15 by 我是wink啊
信息提示
请填处理意见