应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】片段转进去，提质粒酶切发现载体小了，想不明白
51/1返回列表
查看: 2758  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tian1203

银虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】片段转进去，提质粒酶切发现载体小了，想不明白

1200的片段，转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是，用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白，
就是说4800的载体+1200的目的基因，单酶切后理论上应该6000，为啥我的片段看着不到5000？？质粒断了？？

可以确定不是空载体，550的片段以前也出现过这种情况
DL-5000没问题，因为同时跑了DL-2000。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-16 09:52:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

frankstone

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能质粒并没有减小，因为marker是线性DNA，和环状质粒的电泳行为有差异是很正常的。另外，酶切后上样量有点大，也会影响电泳的。如果想验证，可以用不同的酶切试试。供参考吧。
赞一下 回复此楼
18楼2012-06-26 18:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

tian1203

银虫 (著名写手)
赞一下 回复此楼
2楼2010-12-16 10:11:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)
手机拍的，质量不好。请教各位高手原因
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-16 10:13:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-16 12:57:44
tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:20:36
tian1203(金币+1):菌长的不多，其它的菌也是如此 2010-12-16 15:02:34
可以多挑几个阳性克隆，看看是不是都是这个情况
也可以尝试其他酶的双酶切，以至于3酶切，可以粗略估计哪一段缺失了，记得做个空载体对照；
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-12-16 12:40:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭