应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】片段转进去，提质粒酶切发现载体小了，想不明白
201/1返回列表
查看: 3048  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tian1203

银虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】片段转进去，提质粒酶切发现载体小了，想不明白

1200的片段，转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是，用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白，
就是说4800的载体+1200的目的基因，单酶切后理论上应该6000，为啥我的片段看着不到5000？？质粒断了？？

可以确定不是空载体，550的片段以前也出现过这种情况
DL-5000没问题，因为同时跑了DL-2000。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-16 09:52:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)
赞一下 回复此楼
2楼2010-12-16 10:11:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)
手机拍的，质量不好。请教各位高手原因
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-16 10:13:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-16 12:57:44
tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:20:36
tian1203(金币+1):菌长的不多，其它的菌也是如此 2010-12-16 15:02:34
可以多挑几个阳性克隆，看看是不是都是这个情况
也可以尝试其他酶的双酶切，以至于3酶切，可以粗略估计哪一段缺失了，记得做个空载体对照；
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-12-16 12:40:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:20:52
我有一次连的酶切出来是目的基因莫名其妙短了1000bp，现在还不晓得原因~
赞一下 回复此楼
5楼2010-12-16 13:04:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
tian1203(金币+2):应该是最常见的，荧光素酶表达载体 2010-12-16 18:33:55
其实很想知道lz用的是什么载体，什么启动子
赞一下 回复此楼
7楼2010-12-16 16:51:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
tian1203(金币+2): 2010-12-16 18:34:12
做实验很多时候都会莫名其妙的的现象
赞一下 回复此楼
8楼2010-12-16 17:23:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)
求助
回复此楼
9楼2010-12-17 11:31:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)
还是不知道原因
回复此楼
10楼2010-12-24 10:45:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by tian1203 at 2010-12-16 09:52:40:
1200的片段，转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是，用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白，
就是说4800的载体+1200的目的基因， ...

楼主你空质粒酶切跑个对照看看，会不会是质粒上面某个位点发生突变，然后刚好被你的酶识别？
赞一下 回复此楼
11楼2010-12-24 10:50:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可可猫

铜虫 (小有名气)
tian1203(金币+2):今天重做，还是同样的问题，郁闷 2010-12-26 14:28:32
我也跟lz遇到相同问题了

转化后发现重组质粒比空质粒大小还要小点
赞一下 回复此楼
12楼2010-12-24 14:02:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sanmaoecho

金虫 (小有名气)
质粒有突变，多了一个酶切位点？可能性很小的吧
赞一下 回复此楼
13楼2010-12-24 14:50:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaomu3811

金虫 (小有名气)
tian1203(金币+2):我的去测序，直接就失败 2010-12-26 14:29:00
引用回帖:
Originally posted by tian1203 at 2010-12-16 09:52:40:
1200的片段，转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是，用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白，
就是说4800的载体+1200的目的基因， ...

我也遇到了同样的情况，不知道是什么原因，我插入了一个约1800的片段，但是构建好的重组载体竟然比空载体小很多，但是我测序后证明了确实有我的目的片段插入。实在是解释不了，希望高手解答！
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

淡水生烟
14楼2010-12-24 16:54:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)
一个月了，还是这样。到底是啥原因？？？
赞一下 回复此楼
15楼2010-12-26 14:30:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)
赞一下 回复此楼
16楼2010-12-26 14:38:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)
连接前后
回复此楼
17楼2010-12-26 14:38:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

frankstone

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能质粒并没有减小，因为marker是线性DNA，和环状质粒的电泳行为有差异是很正常的。另外，酶切后上样量有点大，也会影响电泳的。如果想验证，可以用不同的酶切试试。供参考吧。
赞一下 回复此楼
18楼2012-06-26 18:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caveolim1

新虫 (初入文坛)
同问
回复此楼
19楼2015-09-25 21:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡水生烟

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by xiaomu3811 at 2010-12-24 16:54:36
我也遇到了同样的情况，不知道是什么原因，我插入了一个约1800的片段，但是构建好的重组载体竟然比空载体小很多，但是我测序后证明了确实有我的目的片段插入。实在是解释不了，希望高手解答！...

你好，我现在也遇到过了这种情况，就是重组质粒比空白对照小。请问你是怎么解决的那
赞一下 回复此楼
20楼2015-11-20 21:40:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
catsupport6楼
2010-12-16 13:12   回复  
tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:21:07
相关版块跳转 我要订阅楼主 tian1203 的主题更新
201/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 299求调剂 +6 △小透明* 2026-03-17 6/300 2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭