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tian1203

银虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】片段转进去,提质粒酶切发现载体小了,想不明白

1200的片段,转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是,用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白,
就是说4800的载体+1200的目的基因,单酶切后理论上应该6000,为啥我的片段看着不到5000??质粒断了??

可以确定不是空载体,550的片段以前也出现过这种情况
DL-5000没问题,因为同时跑了DL-2000。
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xiaomu3811

金虫 (小有名气)


tian1203(金币+2):我的去测序,直接就失败 2010-12-26 14:29:00
引用回帖:
Originally posted by tian1203 at 2010-12-16 09:52:40:
1200的片段,转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是,用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白,
就是说4800的载体+1200的目的基因, ...

我也遇到了同样的情况,不知道是什么原因,我插入了一个约1800的片段,但是构建好的重组载体竟然比空载体小很多,但是我测序后证明了确实有我的目的片段插入。实在是解释不了,希望高手解答!

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14楼2010-12-24 16:54:36
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