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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】片段转进去，提质粒酶切发现载体小了，想不明白
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tian1203

银虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】片段转进去，提质粒酶切发现载体小了，想不明白

1200的片段，转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是，用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白，
就是说4800的载体+1200的目的基因，单酶切后理论上应该6000，为啥我的片段看着不到5000？？质粒断了？？

可以确定不是空载体，550的片段以前也出现过这种情况
DL-5000没问题，因为同时跑了DL-2000。
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1楼 2010-12-16 09:52:40
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xiaomu3811

金虫 (小有名气)
tian1203(金币+2):我的去测序，直接就失败 2010-12-26 14:29:00
引用回帖:
Originally posted by tian1203 at 2010-12-16 09:52:40:
1200的片段，转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是，用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白，
就是说4800的载体+1200的目的基因， ...

我也遇到了同样的情况，不知道是什么原因，我插入了一个约1800的片段，但是构建好的重组载体竟然比空载体小很多，但是我测序后证明了确实有我的目的片段插入。实在是解释不了，希望高手解答！
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淡水生烟
14楼2010-12-24 16:54:36
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tian1203

银虫 (著名写手)
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2楼2010-12-16 10:11:58
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tian1203

银虫 (著名写手)
手机拍的，质量不好。请教各位高手原因
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3楼2010-12-16 10:13:10
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-16 12:57:44
tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:20:36
tian1203(金币+1):菌长的不多，其它的菌也是如此 2010-12-16 15:02:34
可以多挑几个阳性克隆，看看是不是都是这个情况
也可以尝试其他酶的双酶切，以至于3酶切，可以粗略估计哪一段缺失了，记得做个空载体对照；
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4楼2010-12-16 12:40:01
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