24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3074  |  回复: 19

tian1203

银虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】片段转进去,提质粒酶切发现载体小了,想不明白

1200的片段,转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是,用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白,
就是说4800的载体+1200的目的基因,单酶切后理论上应该6000,为啥我的片段看着不到5000??质粒断了??

可以确定不是空载体,550的片段以前也出现过这种情况
DL-5000没问题,因为同时跑了DL-2000。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


2楼2010-12-16 10:11:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


手机拍的,质量不好。请教各位高手原因
3楼2010-12-16 10:13:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)



dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-16 12:57:44
tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:20:36
tian1203(金币+1):菌长的不多,其它的菌也是如此 2010-12-16 15:02:34
可以多挑几个阳性克隆,看看是不是都是这个情况
也可以尝试其他酶的双酶切,以至于3酶切,可以粗略估计哪一段缺失了,记得做个空载体对照;
4楼2010-12-16 12:40:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)


tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:20:52
我有一次连的酶切出来是目的基因莫名其妙短了1000bp,现在还不晓得原因~
5楼2010-12-16 13:04:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)


tian1203(金币+2):应该是最常见的,荧光素酶表达载体 2010-12-16 18:33:55
其实很想知道lz用的是什么载体,什么启动子
7楼2010-12-16 16:51:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainwander

铁杆木虫 (知名作家)


tian1203(金币+2): 2010-12-16 18:34:12
做实验很多时候都会莫名其妙的的现象
8楼2010-12-16 17:23:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


9楼2010-12-17 11:31:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


还是不知道原因
10楼2010-12-24 10:45:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
引用回帖:
Originally posted by tian1203 at 2010-12-16 09:52:40:
1200的片段,转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是,用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白,
就是说4800的载体+1200的目的基因, ...

楼主你空质粒酶切跑个对照看看,会不会是质粒上面某个位点发生突变,然后刚好被你的酶识别?
11楼2010-12-24 10:50:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可可猫

铜虫 (小有名气)


tian1203(金币+2):今天重做,还是同样的问题,郁闷 2010-12-26 14:28:32
我也跟lz遇到相同问题了

转化后发现重组质粒比空质粒大小还要小点
12楼2010-12-24 14:02:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sanmaoecho

金虫 (小有名气)


质粒有突变,多了一个酶切位点?可能性很小的吧
13楼2010-12-24 14:50:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaomu3811

金虫 (小有名气)


tian1203(金币+2):我的去测序,直接就失败 2010-12-26 14:29:00
引用回帖:
Originally posted by tian1203 at 2010-12-16 09:52:40:
1200的片段,转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是,用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白,
就是说4800的载体+1200的目的基因, ...

我也遇到了同样的情况,不知道是什么原因,我插入了一个约1800的片段,但是构建好的重组载体竟然比空载体小很多,但是我测序后证明了确实有我的目的片段插入。实在是解释不了,希望高手解答!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

14楼2010-12-24 16:54:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


一个月了,还是这样。到底是啥原因???
15楼2010-12-26 14:30:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


16楼2010-12-26 14:38:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)


连接前后
17楼2010-12-26 14:38:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

frankstone

铜虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能质粒并没有减小,因为marker是线性DNA,和环状质粒的电泳行为有差异是很正常的。另外,酶切后上样量有点大,也会影响电泳的。如果想验证,可以用不同的酶切试试。供参考吧。
18楼2012-06-26 18:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caveolim1

新虫 (初入文坛)


19楼2015-09-25 21:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡水生烟

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by xiaomu3811 at 2010-12-24 16:54:36
我也遇到了同样的情况,不知道是什么原因,我插入了一个约1800的片段,但是构建好的重组载体竟然比空载体小很多,但是我测序后证明了确实有我的目的片段插入。实在是解释不了,希望高手解答!...

你好,我现在也遇到过了这种情况,就是重组质粒比空白对照小。请问你是怎么解决的那
20楼2015-11-20 21:40:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
2010-12-16 13:12   回复  
tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:21:07
相关版块跳转 我要订阅楼主 tian1203 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +10 junqihahaha 2026-03-26 11/550 2026-03-27 01:15 by yhmsz
[考研] 0703化学338求调剂! +5 Zuhui0306 2026-03-26 6/300 2026-03-26 23:42 by 381988266
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +5 材料cailiao 2026-03-21 5/250 2026-03-26 20:41 by fmesaito
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 085600材料与化工306 +7 z1z2z3879 2026-03-21 7/350 2026-03-26 17:59 by fmesaito
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +5 kongweilin 2026-03-26 7/350 2026-03-26 14:37 by mapenggao
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。,。,。,。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315(英一)求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见