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tian1203

银虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】片段转进去,提质粒酶切发现载体小了,想不明白

1200的片段,转进4800的表达载体
阳性克隆检测非常亮且大小正确。提质粒酶切1200的片段也切了下来。

但是,用DL-5000检测发现载体比理论小了1000-2000bp。非常想不明白,
就是说4800的载体+1200的目的基因,单酶切后理论上应该6000,为啥我的片段看着不到5000??质粒断了??

可以确定不是空载体,550的片段以前也出现过这种情况
DL-5000没问题,因为同时跑了DL-2000。
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j2

木虫 (正式写手)


tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:20:52
我有一次连的酶切出来是目的基因莫名其妙短了1000bp,现在还不晓得原因~
5楼2010-12-16 13:04:51
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tian1203

银虫 (著名写手)


2楼2010-12-16 10:11:58
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tian1203

银虫 (著名写手)


手机拍的,质量不好。请教各位高手原因
3楼2010-12-16 10:13:10
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)



dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-16 12:57:44
tian1203(金币+2): 2010-12-16 14:20:36
tian1203(金币+1):菌长的不多,其它的菌也是如此 2010-12-16 15:02:34
可以多挑几个阳性克隆,看看是不是都是这个情况
也可以尝试其他酶的双酶切,以至于3酶切,可以粗略估计哪一段缺失了,记得做个空载体对照;
4楼2010-12-16 12:40:01
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