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暗星

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】启动子缺失载体的构建 已有5人参与

最近构建了启动子的缺失载体,但是转烟草之后GUS染色一直没有染出来,请教各位高手指点一下!
注:后来分析序列时,得知在GUS起始密码子上有还有一个ATG(启动子上的),但是并没有造成GUS的移码突变,只是可能会在GUS蛋白前面添加44个氨基酸,难道这样会造成染色失败吗?
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wxf8470

木虫 (小有名气)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-25 08:17:44
可能是载体出问题了。找一个可以做阳性对照的转基因烟草,排除染色是否有问题。
重新构建载体,把启动子上的ATG去掉。看能否同时转烟草和拟南芥。
6楼2010-10-25 02:26:45
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小林mxm

木虫 (正式写手)

刚健


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也想请教,哪位高人给指点指点啊!
君子之道,譬如行远,必自迩:譬如登高,必自卑!
2楼2010-10-24 10:35:26
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
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amisking(金币+2):幸苦! 2010-10-24 14:17:17
1、你确定得到了转基因植株吗?最好用GUS基因座探针做southern blot验证一下
2、 GUS staining 过程是否正确
3、 没有强启动子,可能导致GUS表达不强
3楼2010-10-24 10:59:53
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
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amisking(金币+2):good! 2010-10-24 14:17:28
GUS活性比较强的,一般融合蛋白对GUS部分的空间结构影响不大,也会有活性

而且仅仅有个ATG是不足以导致表达的。ATG只是翻译的起点,ATG之前没有起始转录必须的元件的话是不能引发转录的。mRNA都没有,哪来蛋白?得看ATG之前序列是什么才好分析
4楼2010-10-24 13:58:19
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