应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】寻求用通用引物进行菌落PCR，无条带的原因
51/1返回列表
查看: 1621  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

nigel.lin

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】寻求用通用引物进行菌落PCR，无条带的原因

小弟这几天用通用引物进行菌落PCR筛选阳性克隆居然无条带，而阳性对照用空质粒当模板能p出较小的条带；如果是没连上目的基因，也应该出现与阳性对照同大小片段才对啊。很诡异！以前我都这样做都没出现这种情况。  请各位资深指点下，非常感谢！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-04 17:20:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zx1984

木虫 (正式写手)
nigel.lin(金币+2):感谢回复 2011-01-04 21:16:51
有可能没挑到菌，建议挑3-6个做一下，还有加长预变性时间和延伸时间。
赞一下 回复此楼
4楼2011-01-04 19:43:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

DH5a

银虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-04 19:06:56
nigel.lin(金币+2):感谢回复 2011-01-04 21:16:33
第一的你的菌是不是很难的溶解导致你的DNA没有释放出来。可以适当把预变性时间延长。第二，增加引物浓度。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-01-04 17:51:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nigel.lin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by DH5a at 2011-01-04 17:51:12:
第一的你的菌是不是很难的溶解导致你的DNA没有释放出来。可以适当把预变性时间延长。第二，增加引物浓度。

预变性10min，以前都这样没问题啊； 我在20微升体系中加0.5微升，以前也这样也没问题啊。
赞一下 回复此楼
3楼2011-01-04 18:07:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭