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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】农杆菌菌落
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695

木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】农杆菌菌落已有10人参与

大家好，想请教下在做转基因的朋友们关于农杆菌！构建好的质粒转进去农杆菌感受态EHA105里，平板是YEB, RIF抗性和质粒的Spec抗性筛选，想问问这个菌落长出来应该有什么特征，看网上有人说偏黄色，菌面有点粘，易扎堆，感觉都不是主要特征，我现在的板子因为加了利福平之后，整个板子都是偏黄的，看着菌落几乎是白色的，这样的算正常吗？菌落PCR验证是对的。谢谢
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1楼2010-06-30 19:05:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+5):欢迎发帖交流！ 2010-06-30 20:30:34
农杆菌菌落稍微有点黄，但是和加了利福平的板子比起来肯定要浅多了，比大肠杆菌菌落颜色深。

PCR验证对的话应该没什么问题，可以提质粒酶切鉴定一下，不过农杆菌质粒不太好提。

加了利福平的话一般不会有杂菌的
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2楼2010-06-30 19:56:18
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普通回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流 2010-06-30 21:55:17
板子发黄主要是培养基和抗生素的颜色，菌落生长两天后一般就很大了，菌落透明，比较湿润。。。。
你的质粒spe抗性，什么质粒啊，我的质粒也有spe抗性的。。。。
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-06-30 21:32:47
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695

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-30 19:56:18:
农杆菌菌落稍微有点黄，但是和加了利福平的板子比起来肯定要浅多了，比大肠杆菌菌落颜色深。

PCR验证对的话应该没什么问题，可以提质粒酶切鉴定一下，不过农杆菌质粒不太好提。

加了利福平的话一般不会有杂 ...

多谢回复，祝一切顺利！
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4楼2010-07-01 00:39:48
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695

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-06-30 21:32:47:
板子发黄主要是培养基和抗生素的颜色，菌落生长两天后一般就很大了，菌落透明，比较湿润。。。。
你的质粒spe抗性，什么质粒啊，我的质粒也有spe抗性的。。。。

哦，谢谢你的回复，我是从人家手里要的一个专门做GATEWAY CLONE的目的载体
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5楼2010-07-01 00:40:31
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yuanzou2011

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by fungixx at 2010-06-30 21:32:47
板子发黄主要是培养基和抗生素的颜色，菌落生长两天后一般就很大了，菌落透明，比较湿润。。。。
你的质粒spe抗性，什么质粒啊，我的质粒也有spe抗性的。。。。

请问下spec的中文全称是什么？谢了
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6楼2013-06-30 20:44:43
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Spectinomycin 壮观霉素
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7楼2013-06-30 20:53:50
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yuanzou2011

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by starseacow at 2013-06-30 20:53:50
Spectinomycin 壮观霉素

多谢回复！还想问下就是我的重组质粒转入农杆菌EHA105，平板是抗利福平和Spec,长了2天了，只看到有两三个小小的透明的菌落，那个是农杆菌吗？而且我将这些菌落转到Rif, Kam, Hyo的液体培养基培养过夜，还是好稀，是不是时间太短了。
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8楼2013-06-30 21:00:31
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-01 09:18:14
引用回帖:
8楼: Originally posted by yuanzou2011 at 2013-06-30 21:00:31
多谢回复！还想问下就是我的重组质粒转入农杆菌EHA105，平板是抗利福平和Spec,长了2天了，只看到有两三个小小的透明的菌落，那个是农杆菌吗？而且我将这些菌落转到Rif, Kam, Hyo的液体培养基培养过夜，还是好稀，是 ...

首先检查你使用的抗生素是否正确，另外，配置抗生素的时候最好过滤除菌，没有问题的话，只有几个透明菌落也不奇怪，很可能你的感受态菌状态不好，效率偏低。液体培养的话，我的经验是28-30度过夜，可以长得很浑浊。
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9楼2013-07-01 00:26:58
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crace

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好！请问你的Spec抗性筛选时，使用的浓度是多少呢？为什么我转化农杆菌用spec筛选时总长成菌片？多谢！
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10楼2014-12-29 14:22:48
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