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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问农杆菌EHA105有链霉素抗性吗？
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银虫 (小有名气)

[交流] 请问农杆菌EHA105有链霉素抗性吗？ 已有3人参与

如题。网上看了些资料说是这个菌株只抗利福平，但身边也有人说抗链霉素的。马上要做实验了，十分的不踏实呢....
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1楼 2012-03-17 22:56:34
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西瓜

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有条件的话自己试试看嘛。好像之前有人讨论过这个，楼主搜索下帖子吧。
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2楼2012-03-18 17:31:30
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银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-18 17:31:30:
有条件的话自己试试看嘛。好像之前有人讨论过这个，楼主搜索下帖子吧。

本来就是要靠这个特性来判断手头上的菌种是不是这个菌株的....
已经看过前人的讨论了，有的人说有，有的人说没有，搞得我都晕了，然后才发这个贴的...

刚看到原作者对这个问题的回复了：
     It is true that EHA105 should have only rif-resistance (on the
chromosome).  However, when I made the strain, I used pPH1JI as an
eviction plasmid to do the double homologous recombination.  pPH1JI
encodes spec resistance.  We have a version of the strain that has
lost pPH1JI and is spec-sensitive.
     Sincerely,
     Stan

这么说是只有利福平抗性了？
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3楼2012-03-18 18:06:34
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西瓜

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3楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-03-18 18:06:34:
本来就是要靠这个特性来判断手头上的菌种是不是这个菌株的....
已经看过前人的讨论了，有的人说有，有的人说没有，搞得我都晕了，然后才发这个贴的...

刚看到原作者对这个问题的回复了：
     It is true t ...

……这个回复就纠结了。
作者说，本来呢，EHA105这东西，应该是只有Rif抗性的（染色体编码）。但是在做这菌株的时候使用了pPH1JI 这个驱逐质粒，pPH1JI 本身编码Spec抗性基因。所以：如果你的菌株不含pPH1JI 质粒，那么它就只有Rif抗性；如果含pPH1JI 质粒，那么就同时带Rif抗性和Spec抗性。
你可以检测下你的菌株含不含这个质粒就知道了。
另外，作者最后说，他们有确定不含pPH1JI质粒（不带Spec抗性）的EHA105，你也可以考虑问他要这个。
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4楼2012-03-18 18:24:01
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银虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-18 18:24:01:
……这个回复就纠结了。
作者说，本来呢，EHA105这东西，应该是只有Rif抗性的（染色体编码）。但是在做这菌株的时候使用了pPH1JI 这个驱逐质粒，pPH1JI 本身编码Spec抗性基因。所以：如果你的菌株不含pPH1JI 质 ...

哦，真多谢你翻译了一下呢，不然我真看得半懂不懂...
也就是说，Spec/Strep抗性不能作为EHA105的特征，而且该抗性基因也与辅助质粒无关咯。（？）实验室以前都用Strep养EHA105呢，看来以后是没有必要再加这个抗生素了。
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5楼2012-03-18 23:23:20
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西瓜

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5楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-03-18 23:23:20:
哦，真多谢你翻译了一下呢，不然我真看得半懂不懂...
也就是说，Spec/Strep抗性不能作为EHA105的特征，而且该抗性基因也与辅助质粒无关咯。（？）实验室以前都用Strep养EHA105呢，看来以后是没有必要再加这个抗 ...

嗯，Spec抗性不能作为特征。pPH1JI 质粒会慢慢丢掉，所以会出现有的克隆有Sepc抗性，有的没有，用起来很悬。最好单独筛选下不含Spec抗性的EHA105，后续就不要再加Spec了。

[ Last edited by 西瓜 on 2012-3-19 at 09:09 ]
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6楼2012-03-19 09:08:28
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银虫 (小有名气)
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西瓜: 金币+2, 鼓励反馈！ 2012-03-20 15:43:37
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2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-18 17:31:30:
有条件的话自己试试看嘛。好像之前有人讨论过这个，楼主搜索下帖子吧。

试验的结果出来了，也许已经没什么意义了，也发上来吧。
前两天拿自己实验室的菌种和别的实验室的菌种做了一下试验，自己的菌种是一直加strep 50mg/L和rif养的，借来的菌种一直只加rif。各取4个单菌落划到strep浓度梯度平板。培养约40h。
结果是，自己实验室的能耐75mg/L或者以上的strep
借来的只能耐受最高50mg/L的strep

看来我们这两个实验室的菌株都带pPH1JI质粒。
现在不纠结这个问题了，很感谢西瓜版热心的回复呢
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7楼2012-03-20 15:21:55
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king-long

新虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-03-20 15:21:55
试验的结果出来了，也许已经没什么意义了，也发上来吧。
前两天拿自己实验室的菌种和别的实验室的菌种做了一下试验，自己的菌种是一直加strep 50mg/L和rif养的，借来的菌种一直只加rif。各取4个单菌落划到strep浓 ...

spec不是壮观霉素抗性吗？step不是链霉素抗性吗？原作者说pPH1JI质粒带有spec抗性，你用链霉素筛选能说明含不含这个质粒？？
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8楼2015-01-25 23:56:19
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king-long

新虫 (初入文坛)
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EHA105说明下，染色体有利福平抗性，驱使质粒pEHA105含有链霉素抗性。
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9楼2015-01-26 00:00:07
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naringenin

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7楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-03-20 15:21:55
试验的结果出来了，也许已经没什么意义了，也发上来吧。
前两天拿自己实验室的菌种和别的实验室的菌种做了一下试验，自己的菌种是一直加strep 50mg/L和rif养的，借来的菌种一直只加rif。各取4个单菌落划到strep浓 ...

按照作者的论文，pPH1JI是庆大霉素抗性的，和strep抗性毫无关系，而论文中描述EHA105是来源于EHA101就只是去了EHA101的卡纳抗性，但是没有带入其他的抗性，在构建的过程中还专门去掉了四环素的抗性，按照他的论文 EHA105是不带任何抗性标签的。我觉得这个作者肯定有个地方没说清楚。因为不带抗性标签的话，这么多代，Ti质粒还能在吗？
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10楼2015-03-20 22:14:01
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