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XOooZzz

银虫 (小有名气)

[交流] 请问农杆菌EHA105有链霉素抗性吗? 已有3人参与

如题。网上看了些资料说是这个菌株只抗利福平,但身边也有人说抗链霉素的。马上要做实验了,十分的不踏实呢....
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naringenin

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-03-20 15:21:55
试验的结果出来了,也许已经没什么意义了,也发上来吧。
前两天拿自己实验室的菌种和别的实验室的菌种做了一下试验,自己的菌种是一直加strep 50mg/L和rif养的,借来的菌种一直只加rif。各取4个单菌落划到strep浓 ...

按照作者的论文,pPH1JI是庆大霉素抗性的,和strep抗性毫无关系,而论文中描述EHA105是来源于EHA101就只是去了EHA101的卡纳抗性,但是没有带入其他的抗性,在构建的过程中还专门去掉了四环素的抗性,按照他的论文 EHA105是不带任何抗性标签的。我觉得这个作者肯定有个地方没说清楚。因为不带抗性标签的话,这么多代,Ti质粒还能在吗?
10楼2015-03-20 22:14:01
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有条件的话自己试试看嘛。好像之前有人讨论过这个,楼主搜索下帖子吧。
2楼2012-03-18 17:31:30
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-18 17:31:30:
有条件的话自己试试看嘛。好像之前有人讨论过这个,楼主搜索下帖子吧。

本来就是要靠这个特性来判断手头上的菌种是不是这个菌株的....
已经看过前人的讨论了,有的人说有,有的人说没有,搞得我都晕了,然后才发这个贴的...

刚看到原作者对这个问题的回复了:
     It is true that EHA105 should have only rif-resistance (on the
chromosome).  However, when I made the strain, I used pPH1JI as an
eviction plasmid to do the double homologous recombination.  pPH1JI
encodes spec resistance.  We have a version of the strain that has
lost pPH1JI and is spec-sensitive.
     Sincerely,
     Stan

这么说是只有利福平抗性了?
3楼2012-03-18 18:06:34
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-03-18 18:06:34:
本来就是要靠这个特性来判断手头上的菌种是不是这个菌株的....
已经看过前人的讨论了,有的人说有,有的人说没有,搞得我都晕了,然后才发这个贴的...

刚看到原作者对这个问题的回复了:
     It is true t ...

……这个回复就纠结了。
作者说,本来呢,EHA105这东西,应该是只有Rif抗性的(染色体编码)。但是在做这菌株的时候使用了pPH1JI 这个驱逐质粒,pPH1JI 本身编码Spec抗性基因。所以:如果你的菌株不含pPH1JI 质粒,那么它就只有Rif抗性;如果含pPH1JI 质粒,那么就同时带Rif抗性和Spec抗性。
你可以检测下你的菌株含不含这个质粒就知道了。
另外,作者最后说,他们有确定不含pPH1JI质粒(不带Spec抗性)的EHA105,你也可以考虑问他要这个。
4楼2012-03-18 18:24:01
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