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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问农杆菌EHA105有链霉素抗性吗？
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

[交流] 请问农杆菌EHA105有链霉素抗性吗？ 已有3人参与

如题。网上看了些资料说是这个菌株只抗利福平，但身边也有人说抗链霉素的。马上要做实验了，十分的不踏实呢....
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1楼 2012-03-17 22:56:34
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naringenin

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
7楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-03-20 15:21:55
试验的结果出来了，也许已经没什么意义了，也发上来吧。
前两天拿自己实验室的菌种和别的实验室的菌种做了一下试验，自己的菌种是一直加strep 50mg/L和rif养的，借来的菌种一直只加rif。各取4个单菌落划到strep浓 ...

按照作者的论文，pPH1JI是庆大霉素抗性的，和strep抗性毫无关系，而论文中描述EHA105是来源于EHA101就只是去了EHA101的卡纳抗性，但是没有带入其他的抗性，在构建的过程中还专门去掉了四环素的抗性，按照他的论文 EHA105是不带任何抗性标签的。我觉得这个作者肯定有个地方没说清楚。因为不带抗性标签的话，这么多代，Ti质粒还能在吗？
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10楼2015-03-20 22:14:01
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
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有条件的话自己试试看嘛。好像之前有人讨论过这个，楼主搜索下帖子吧。
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2楼2012-03-18 17:31:30
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-18 17:31:30:
有条件的话自己试试看嘛。好像之前有人讨论过这个，楼主搜索下帖子吧。

本来就是要靠这个特性来判断手头上的菌种是不是这个菌株的....
已经看过前人的讨论了，有的人说有，有的人说没有，搞得我都晕了，然后才发这个贴的...

刚看到原作者对这个问题的回复了：
     It is true that EHA105 should have only rif-resistance (on the
chromosome).  However, when I made the strain, I used pPH1JI as an
eviction plasmid to do the double homologous recombination.  pPH1JI
encodes spec resistance.  We have a version of the strain that has
lost pPH1JI and is spec-sensitive.
     Sincerely,
     Stan

这么说是只有利福平抗性了？
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3楼2012-03-18 18:06:34
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-03-18 18:06:34:
本来就是要靠这个特性来判断手头上的菌种是不是这个菌株的....
已经看过前人的讨论了，有的人说有，有的人说没有，搞得我都晕了，然后才发这个贴的...

刚看到原作者对这个问题的回复了：
     It is true t ...

……这个回复就纠结了。
作者说，本来呢，EHA105这东西，应该是只有Rif抗性的（染色体编码）。但是在做这菌株的时候使用了pPH1JI 这个驱逐质粒，pPH1JI 本身编码Spec抗性基因。所以：如果你的菌株不含pPH1JI 质粒，那么它就只有Rif抗性；如果含pPH1JI 质粒，那么就同时带Rif抗性和Spec抗性。
你可以检测下你的菌株含不含这个质粒就知道了。
另外，作者最后说，他们有确定不含pPH1JI质粒（不带Spec抗性）的EHA105，你也可以考虑问他要这个。
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4楼2012-03-18 18:24:01
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