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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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银虫 (小有名气)

[交流] 请问农杆菌EHA105有链霉素抗性吗? 已有3人参与

如题。网上看了些资料说是这个菌株只抗利福平,但身边也有人说抗链霉素的。马上要做实验了,十分的不踏实呢....
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西瓜

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有条件的话自己试试看嘛。好像之前有人讨论过这个,楼主搜索下帖子吧。
2楼2012-03-18 17:31:30
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银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-18 17:31:30:
有条件的话自己试试看嘛。好像之前有人讨论过这个,楼主搜索下帖子吧。

本来就是要靠这个特性来判断手头上的菌种是不是这个菌株的....
已经看过前人的讨论了,有的人说有,有的人说没有,搞得我都晕了,然后才发这个贴的...

刚看到原作者对这个问题的回复了:
     It is true that EHA105 should have only rif-resistance (on the
chromosome).  However, when I made the strain, I used pPH1JI as an
eviction plasmid to do the double homologous recombination.  pPH1JI
encodes spec resistance.  We have a version of the strain that has
lost pPH1JI and is spec-sensitive.
     Sincerely,
     Stan

这么说是只有利福平抗性了?
3楼2012-03-18 18:06:34
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西瓜

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-03-18 18:06:34:
本来就是要靠这个特性来判断手头上的菌种是不是这个菌株的....
已经看过前人的讨论了,有的人说有,有的人说没有,搞得我都晕了,然后才发这个贴的...

刚看到原作者对这个问题的回复了:
     It is true t ...

……这个回复就纠结了。
作者说,本来呢,EHA105这东西,应该是只有Rif抗性的(染色体编码)。但是在做这菌株的时候使用了pPH1JI 这个驱逐质粒,pPH1JI 本身编码Spec抗性基因。所以:如果你的菌株不含pPH1JI 质粒,那么它就只有Rif抗性;如果含pPH1JI 质粒,那么就同时带Rif抗性和Spec抗性。
你可以检测下你的菌株含不含这个质粒就知道了。
另外,作者最后说,他们有确定不含pPH1JI质粒(不带Spec抗性)的EHA105,你也可以考虑问他要这个。
4楼2012-03-18 18:24:01
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-18 18:24:01:
……这个回复就纠结了。
作者说,本来呢,EHA105这东西,应该是只有Rif抗性的(染色体编码)。但是在做这菌株的时候使用了pPH1JI 这个驱逐质粒,pPH1JI 本身编码Spec抗性基因。所以:如果你的菌株不含pPH1JI 质 ...

哦,真多谢你翻译了一下呢,不然我真看得半懂不懂...
也就是说,Spec/Strep抗性不能作为EHA105的特征,而且该抗性基因也与辅助质粒无关咯。(?)实验室以前都用Strep养EHA105呢,看来以后是没有必要再加这个抗生素了。
5楼2012-03-18 23:23:20
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西瓜

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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5楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-03-18 23:23:20:
哦,真多谢你翻译了一下呢,不然我真看得半懂不懂...
也就是说,Spec/Strep抗性不能作为EHA105的特征,而且该抗性基因也与辅助质粒无关咯。(?)实验室以前都用Strep养EHA105呢,看来以后是没有必要再加这个抗 ...

嗯,Spec抗性不能作为特征。pPH1JI 质粒会慢慢丢掉,所以会出现有的克隆有Sepc抗性,有的没有,用起来很悬。最好单独筛选下不含Spec抗性的EHA105,后续就不要再加Spec了。

[ Last edited by 西瓜 on 2012-3-19 at 09:09 ]
6楼2012-03-19 09:08:28
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励反馈! 2012-03-20 15:43:37
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-18 17:31:30:
有条件的话自己试试看嘛。好像之前有人讨论过这个,楼主搜索下帖子吧。

试验的结果出来了,也许已经没什么意义了,也发上来吧。
前两天拿自己实验室的菌种和别的实验室的菌种做了一下试验,自己的菌种是一直加strep 50mg/L和rif养的,借来的菌种一直只加rif。各取4个单菌落划到strep浓度梯度平板。培养约40h。
结果是,自己实验室的能耐75mg/L或者以上的strep
借来的只能耐受最高50mg/L的strep

看来我们这两个实验室的菌株都带pPH1JI质粒。
现在不纠结这个问题了,很感谢西瓜版热心的回复呢
7楼2012-03-20 15:21:55
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king-long

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-03-20 15:21:55
试验的结果出来了,也许已经没什么意义了,也发上来吧。
前两天拿自己实验室的菌种和别的实验室的菌种做了一下试验,自己的菌种是一直加strep 50mg/L和rif养的,借来的菌种一直只加rif。各取4个单菌落划到strep浓 ...

spec不是壮观霉素抗性吗?step不是链霉素抗性吗?原作者说pPH1JI质粒带有spec抗性,你用链霉素筛选能说明含不含这个质粒??
8楼2015-01-25 23:56:19
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king-long

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
EHA105说明下,染色体有利福平抗性,驱使质粒pEHA105含有链霉素抗性。
9楼2015-01-26 00:00:07
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naringenin

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-03-20 15:21:55
试验的结果出来了,也许已经没什么意义了,也发上来吧。
前两天拿自己实验室的菌种和别的实验室的菌种做了一下试验,自己的菌种是一直加strep 50mg/L和rif养的,借来的菌种一直只加rif。各取4个单菌落划到strep浓 ...

按照作者的论文,pPH1JI是庆大霉素抗性的,和strep抗性毫无关系,而论文中描述EHA105是来源于EHA101就只是去了EHA101的卡纳抗性,但是没有带入其他的抗性,在构建的过程中还专门去掉了四环素的抗性,按照他的论文 EHA105是不带任何抗性标签的。我觉得这个作者肯定有个地方没说清楚。因为不带抗性标签的话,这么多代,Ti质粒还能在吗?
10楼2015-03-20 22:14:01
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