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kaludefeiyu

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒pCAMBIA1300转入农杆菌EHA105中的问题? 已有1人参与

通过冻融法将质粒转入农杆菌中,使用的是利福平(34ug/ml)和卡那霉素(10ug/ml),大概长了3-4天,长了出来,之后试管摇床后提取质粒,没有提取出来,看到别人有说直接做菌落PCR,那么引物我要用潮霉素基因作引物吗?还有利福平不是抑制质粒生长吗?我加了利福平是不是不好啊?希望大家多多帮忙啊!
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

kaludefeiyu(金币+2): 谢谢 2011-05-29 16:06:36
农杆菌质粒不好提,不过我也提出来了
直接做菌落PCR鉴定吧,用你的目的基因的引物
还有利福平不是抑制质粒生长的
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
2楼2011-05-25 14:09:25
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poog502

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

kaludefeiyu(金币+2): 谢谢 2011-05-29 16:06:59
农杆菌的质粒少 而且不太容易提出来 建议用爱思进的试剂盒提取即可
3楼2011-05-25 22:35:46
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kaludefeiyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 香菱儿 at 2011-05-25 14:09:25:
农杆菌质粒不好提,不过我也提出来了
直接做菌落PCR鉴定吧,用你的目的基因的引物
还有利福平不是抑制质粒生长的

我百度查到利福平好像会抑制质粒生长,如果我将质粒转到农杆菌中,之后涂布菌液直接用质粒上的抗生素就可以了吧。质粒的抗性是卡那霉素和潮霉素,我做菌落PCR的话用潮霉素的引物就可以了吧。
4楼2011-05-29 16:09:48
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

涂布菌液用卡纳和菌株抗性(你用的是农杆菌什么菌株?)
做菌落PCR的话用潮霉素的引物或目的基因引物都行
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
5楼2011-05-29 16:36:03
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

kaludefeiyu(金币+2): 谢谢 2011-05-31 15:09:41
你用的是农杆菌EHA105菌株吧,那就应该是卡纳和利福平抗性平板
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
6楼2011-05-29 16:37:46
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kaludefeiyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 香菱儿 at 2011-05-29 16:36:03:
涂布菌液用卡纳和菌株抗性(你用的是农杆菌什么菌株?)
做菌落PCR的话用潮霉素的引物或目的基因引物都行

农杆菌是EHA105,抗性是利福平,
7楼2011-05-30 13:28:43
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childchou

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

农杆菌质粒的提取要多一步的,要加溶菌酶,提出来一般都很少的,你要验证的话直接菌液PCR就行了,EHA105就是rif+kana抗性,没错的,
boomshakalaka
8楼2014-12-19 13:25:03
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