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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒pCAMBIA1300转入农杆菌EHA105中的问题？
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kaludefeiyu

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒pCAMBIA1300转入农杆菌EHA105中的问题？ 已有1人参与

通过冻融法将质粒转入农杆菌中，使用的是利福平（34ug/ml）和卡那霉素(10ug/ml),大概长了3-4天，长了出来，之后试管摇床后提取质粒，没有提取出来，看到别人有说直接做菌落PCR，那么引物我要用潮霉素基因作引物吗？还有利福平不是抑制质粒生长吗？我加了利福平是不是不好啊？希望大家多多帮忙啊!
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1楼 2011-05-24 10:42:38
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

kaludefeiyu(金币+2): 谢谢 2011-05-29 16:06:36
农杆菌质粒不好提，不过我也提出来了
直接做菌落PCR鉴定吧，用你的目的基因的引物
还有利福平不是抑制质粒生长的
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2楼2011-05-25 14:09:25
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poog502

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

kaludefeiyu(金币+2): 谢谢 2011-05-29 16:06:59
农杆菌的质粒少 而且不太容易提出来 建议用爱思进的试剂盒提取即可
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3楼2011-05-25 22:35:46
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kaludefeiyu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 香菱儿 at 2011-05-25 14:09:25:
农杆菌质粒不好提，不过我也提出来了
直接做菌落PCR鉴定吧，用你的目的基因的引物
还有利福平不是抑制质粒生长的

我百度查到利福平好像会抑制质粒生长，如果我将质粒转到农杆菌中，之后涂布菌液直接用质粒上的抗生素就可以了吧。质粒的抗性是卡那霉素和潮霉素，我做菌落PCR的话用潮霉素的引物就可以了吧。
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4楼2011-05-29 16:09:48
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

涂布菌液用卡纳和菌株抗性（你用的是农杆菌什么菌株？）
做菌落PCR的话用潮霉素的引物或目的基因引物都行
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5楼2011-05-29 16:36:03
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

kaludefeiyu(金币+2): 谢谢 2011-05-31 15:09:41
你用的是农杆菌EHA105菌株吧，那就应该是卡纳和利福平抗性平板
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6楼2011-05-29 16:37:46
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kaludefeiyu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 香菱儿 at 2011-05-29 16:36:03:
涂布菌液用卡纳和菌株抗性（你用的是农杆菌什么菌株？）
做菌落PCR的话用潮霉素的引物或目的基因引物都行

农杆菌是EHA105，抗性是利福平，
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7楼2011-05-30 13:28:43
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childchou

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

农杆菌质粒的提取要多一步的，要加溶菌酶，提出来一般都很少的，你要验证的话直接菌液PCR就行了，EHA105就是rif+kana抗性，没错的，
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boomshakalaka
8楼2014-12-19 13:25:03
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