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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

[求助] 求手抽质粒降解原因

手抽质粒,昨天因为马上使用,为了不影响酶切效率,用去离子水保存,今天电泳后发现降解很严重,网上有人说是DNA酶降解的作用。今天抽提时特地做了对照,第一组用去离子水保存,第二组用加了RNA酶的TE保存,其余步骤完全相同,发现第一组降解仍然严重,第二组没有降解,我推测前面降解是因为DNA酶的作用,大家分析一下是不是我的去离子水出了问题,还是其他原因???多谢~~~
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南极仙翁

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+1): 恩,再重新灭菌看看~~~ 2012-02-05 09:31:32
liuyu_sdili(金币+1): 有帮助 谢谢~~ 2012-02-05 09:32:06
西瓜(金币+2): 欢迎新朋友参与交流! 2012-02-05 12:16:06
很有可能是你的去离子水有问题,你最好用新配置的去离子水
2楼2012-02-05 08:54:59
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703600973

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+1): 有帮助 是的,因为条带呈现比较均匀弥散状,如果有RNA的话下面会很亮~~~ 2012-02-05 10:31:25
西瓜(金币+1): 鼓励交流!质粒很好提的,看情况再考虑试剂盒吧。 2012-02-05 12:19:05
你确定前面讲解的是DNA而不是没提净的RNA,推荐用试剂盒
3楼2012-02-05 10:06:34
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+2): ★★★很有帮助 好的,我试试看 2012-02-05 15:43:01
如果是手提质粒的话,应该是第一组 的质粒 含大量RNA,所以感觉是降解一样,其实如果你跑完电泳后发现有smear,然后在剩下的质粒里加RNase,消化后再跑电泳,就会发现其实质粒还在,而且基本没降解。我也是手提质粒的,半年内基本不会有问题,而且是4度保持的。
4楼2012-02-05 12:59:35
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hyhl

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jiaxinfish at 2012-02-05 12:59:35:
如果是手提质粒的话,应该是第一组 的质粒 含大量RNA,所以感觉是降解一样,其实如果你跑完电泳后发现有smear,然后在剩下的质粒里加RNase,消化后再跑电泳,就会发现其实质粒还在,而且基本没降解。我也是手提质 ...

同意楼上意见,应该是不会象楼主说的那样降解那么厉害的,请仔细判断你的电泳结果,不要太着急看胶,多跑一会!
5楼2012-02-05 13:23:27
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longrna

新虫 (正式写手)

同意为RNA污染(RNA没有去除干净)的说法。
大肠杆菌没有那么多的DNase来降解那么稳定的质粒DNA。
伟大航线....
6楼2012-02-06 08:48:28
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加内特

金虫 (正式写手)

顶一个,长见识了
少壮不努力,老大徒伤悲!
7楼2012-02-06 09:22:36
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

引用回帖:
: Originally posted by jiaxinfish at 2012-02-05 12:59:35:
如果是手提质粒的话,应该是第一组 的质粒 含大量RNA,所以感觉是降解一样,其实如果你跑完电泳后发现有smear,然后在剩下的质粒里加RNase,消化后再跑电泳,就会发现其实质粒还在,而且基本没降解。我也是手提质 ...

原因找出来了,其一是去离子水溶解后没有混匀,上样时只取了上层,所以带很浅,去离子水木有问题,其二如同您所说,RNA太亮。谢谢指教~~~
8楼2012-02-06 10:32:04
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