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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求手抽质粒降解原因
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

[求助] 求手抽质粒降解原因

手抽质粒，昨天因为马上使用，为了不影响酶切效率，用去离子水保存，今天电泳后发现降解很严重，网上有人说是DNA酶降解的作用。今天抽提时特地做了对照，第一组用去离子水保存，第二组用加了RNA酶的TE保存，其余步骤完全相同，发现第一组降解仍然严重，第二组没有降解，我推测前面降解是因为DNA酶的作用，大家分析一下是不是我的去离子水出了问题，还是其他原因？？？多谢~~~
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1楼 2012-02-04 17:35:05
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南极仙翁

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+1): 恩，再重新灭菌看看~~~ 2012-02-05 09:31:32
liuyu_sdili(金币+1): ★有帮助 谢谢~~ 2012-02-05 09:32:06
西瓜(金币+2): 欢迎新朋友参与交流！ 2012-02-05 12:16:06
很有可能是你的去离子水有问题，你最好用新配置的去离子水
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2楼2012-02-05 08:54:59
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703600973

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+1): ★有帮助 是的，因为条带呈现比较均匀弥散状，如果有RNA的话下面会很亮~~~ 2012-02-05 10:31:25
西瓜(金币+1): 鼓励交流！质粒很好提的，看情况再考虑试剂盒吧。 2012-02-05 12:19:05
你确定前面讲解的是DNA而不是没提净的RNA，推荐用试剂盒
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3楼2012-02-05 10:06:34
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+2): ★★★很有帮助 好的，我试试看 2012-02-05 15:43:01
如果是手提质粒的话，应该是第一组 的质粒 含大量RNA，所以感觉是降解一样，其实如果你跑完电泳后发现有smear，然后在剩下的质粒里加RNase，消化后再跑电泳，就会发现其实质粒还在，而且基本没降解。我也是手提质粒的，半年内基本不会有问题，而且是4度保持的。
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4楼2012-02-05 12:59:35
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hyhl

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jiaxinfish at 2012-02-05 12:59:35:
如果是手提质粒的话，应该是第一组 的质粒 含大量RNA，所以感觉是降解一样，其实如果你跑完电泳后发现有smear，然后在剩下的质粒里加RNase，消化后再跑电泳，就会发现其实质粒还在，而且基本没降解。我也是手提质 ...

同意楼上意见，应该是不会象楼主说的那样降解那么厉害的，请仔细判断你的电泳结果，不要太着急看胶，多跑一会！
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5楼2012-02-05 13:23:27
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longrna

新虫 (正式写手)
同意为RNA污染（RNA没有去除干净）的说法。
大肠杆菌没有那么多的DNase来降解那么稳定的质粒DNA。
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伟大航线....
6楼2012-02-06 08:48:28
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加内特

金虫 (正式写手)
顶一个，长见识了
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少壮不努力，老大徒伤悲！
7楼2012-02-06 09:22:36
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by jiaxinfish at 2012-02-05 12:59:35:
如果是手提质粒的话，应该是第一组 的质粒 含大量RNA，所以感觉是降解一样，其实如果你跑完电泳后发现有smear，然后在剩下的质粒里加RNase，消化后再跑电泳，就会发现其实质粒还在，而且基本没降解。我也是手提质 ...

原因找出来了，其一是去离子水溶解后没有混匀，上样时只取了上层，所以带很浅，去离子水木有问题，其二如同您所说，RNA太亮。谢谢指教~~~
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8楼2012-02-06 10:32:04
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