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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒降解求教！急！
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ap

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒降解求教！急！ 已有6人参与

用promega试剂盒提取一个大小为6.7kb的质粒，对它进行Hind III和Kpn I的单酶切验证，酶是fermentas的快速酶，酶切时间为10min（图1）


将这个质粒，在4℃放了24小时，自己降解没了。


请问是什么原因导致的降解啊？
我用的质粒宿主是top10，提质粒洗脱时，用的是试剂盒自带的Elution buffer。
以前也经常遇到质粒降解的问题，怀疑是我自己操作不当，可是仔细对照了质粒提取试剂盒的protocol，还是没有找到原因。我提别人的质粒也降解了。请高手指点啊！

[ Last edited by ap on 2010-11-24 at 11:17 ]
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junjieshao

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1楼 2010-11-24 10:59:04
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胖胖113

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果步骤和试剂盒都没有问题的话，就考虑一下你的用品，是否做好灭菌的工作，还有救是你的DNA样品，在酶切之前跑个电泳，看看样品的DNA质量
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2楼2010-11-24 11:07:16
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胖胖113

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):热心，欢迎常来 2010-11-24 13:05:00
我看Marker不是很清楚，电泳跑的效果也不好，电泳缓冲液配的问题考虑过吗
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3楼2010-11-24 11:10:29
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ap

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 胖胖113 at 2010-11-24 11:07:16:
如果步骤和试剂盒都没有问题的话，就考虑一下你的用品，是否做好灭菌的工作，还有救是你的DNA样品，在酶切之前跑个电泳，看看样品的DNA质量

谢谢，1ml枪尖没灭菌，可是我同时做的PCR胶回收也是用这套枪尖，没有出现降解啊。

我刚才跑了个电泳，重新编辑了一下帖子。
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4楼2010-11-24 11:19:43
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j2

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by ap at 2010-11-24 11:19:43:


谢谢，1ml枪尖没灭菌，可是我同时做的PCR胶回收也是用这套枪尖，没有出现降解啊。

我刚才跑了个电泳，重新编辑了一下帖子。

枪头不消就做酶切，很厉害啊。
你怎么确定不是枪头造成的？如果是胶回收时候污染的呢？降解需要一段时间，胶回收时污染了，但当时你就电泳了，还没降解完呢？
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
5楼2010-11-24 12:34:49
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ap

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by j2 at 2010-11-24 12:34:49:

枪头不消就做酶切，很厉害啊。
你怎么确定不是枪头造成的？如果是胶回收时候污染的呢？降解需要一段时间，胶回收时污染了，但当时你就电泳了，还没降解完呢？

谢谢。
我提出的质粒，没有经过任何处理，在4℃放了24小时，就降解了。
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6楼2010-11-24 12:55:16
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
可能是存在DNase。
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7楼2010-11-24 13:15:58
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j2

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by ap at 2010-11-24 12:55:16:


谢谢。
我提出的质粒，没有经过任何处理，在4℃放了24小时，就降解了。

难道试剂盒的某试剂被DNase污染
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
8楼2010-11-25 12:54:24
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lixinlihu
9楼2013-12-28 10:37:40
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junjieshao

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
本帖内容被屏蔽
10楼2020-07-01 04:06:35
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