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ap

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒降解求教!急! 已有6人参与

用promega试剂盒提取一个大小为6.7kb的质粒,对它进行Hind III和Kpn I的单酶切验证,酶是fermentas的快速酶,酶切时间为10min(图1)


将这个质粒,在4℃放了24小时,自己降解没了。


请问是什么原因导致的降解啊?
我用的质粒宿主是top10,提质粒洗脱时,用的是试剂盒自带的Elution buffer。
以前也经常遇到质粒降解的问题,怀疑是我自己操作不当,可是仔细对照了质粒提取试剂盒的protocol,还是没有找到原因。我提别人的质粒也降解了。请高手指点啊!

[ Last edited by ap on 2010-11-24 at 11:17 ]
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胖胖113

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果步骤和试剂盒都没有问题的话,就考虑一下你的用品,是否做好灭菌的工作,还有救是你的DNA样品,在酶切之前跑个电泳,看看样品的DNA质量
2楼2010-11-24 11:07:16
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胖胖113

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):热心,欢迎常来 2010-11-24 13:05:00
我看Marker不是很清楚,电泳跑的效果也不好,电泳缓冲液配的问题考虑过吗
3楼2010-11-24 11:10:29
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ap

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 胖胖113 at 2010-11-24 11:07:16:
如果步骤和试剂盒都没有问题的话,就考虑一下你的用品,是否做好灭菌的工作,还有救是你的DNA样品,在酶切之前跑个电泳,看看样品的DNA质量

谢谢,1ml枪尖没灭菌,可是我同时做的PCR胶回收也是用这套枪尖,没有出现降解啊。

我刚才跑了个电泳,重新编辑了一下帖子。
4楼2010-11-24 11:19:43
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j2

木虫 (正式写手)


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引用回帖:
Originally posted by ap at 2010-11-24 11:19:43:


谢谢,1ml枪尖没灭菌,可是我同时做的PCR胶回收也是用这套枪尖,没有出现降解啊。

我刚才跑了个电泳,重新编辑了一下帖子。

枪头不消就做酶切,很厉害啊。
你怎么确定不是枪头造成的?如果是胶回收时候污染的呢?降解需要一段时间,胶回收时污染了,但当时你就电泳了,还没降解完呢?
修炼ing,当虫仙……
5楼2010-11-24 12:34:49
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ap

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by j2 at 2010-11-24 12:34:49:

枪头不消就做酶切,很厉害啊。
你怎么确定不是枪头造成的?如果是胶回收时候污染的呢?降解需要一段时间,胶回收时污染了,但当时你就电泳了,还没降解完呢?

谢谢。
我提出的质粒,没有经过任何处理,在4℃放了24小时,就降解了。
6楼2010-11-24 12:55:16
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

可能是存在DNase。
7楼2010-11-24 13:15:58
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j2

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by ap at 2010-11-24 12:55:16:


谢谢。
我提出的质粒,没有经过任何处理,在4℃放了24小时,就降解了。

难道试剂盒的某试剂被DNase污染
修炼ing,当虫仙……
8楼2010-11-25 12:54:24
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9楼2013-12-28 10:37:40
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junjieshao

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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10楼2020-07-01 04:06:35
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