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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】寻高手解答：提取质粒老是降解怎么回事？
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fywjp

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】寻高手解答：提取质粒老是降解怎么回事？ 已有8人参与

寻高手解答：提取质粒老是降解怎么回事？
我是提取大肠杆菌质粒PET28a，每次都是，用含RNA酶的TE溶了之后就很明显的降解了，怎么回事啊？请高手指教，我应该注意什么，谢谢
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1楼 2010-04-16 21:37:54
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-04-17 12:02
宿主菌有核酸降解酶存在
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小木虫之有关部门负责人
2楼2010-04-16 22:06:50
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
你提质粒过程中用氛氯仿抽屉两边就ok啦
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小木虫之有关部门负责人
3楼2010-04-16 22:21:23
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段家一凡

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很可能是你的RNAase没有煮沸处理，还有DNAase活性。你可以用一般的TE或水溶解，然后检测是否还降解。
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4楼2010-04-17 00:47:51
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hyw1989960

木虫 (正式写手)

快乐家族二十八
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
以前都没怎么注意,
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快乐家族
5楼2010-04-18 19:02:09
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fywjp

木虫 (正式写手)
谢谢大家，现在问题解决了，还是操作的问题，应该是操作时候手指头碰到了ep管的盖子内侧所造成的污染感谢大家，小虫谢谢了
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6楼2010-04-30 12:56:11
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wuweibewin

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by fywjp at 2010-04-30 12:56:11:
谢谢大家，现在问题解决了，还是操作的问题，应该是操作时候手指头碰到了ep管的盖子内侧所造成的污染感谢大家，小虫谢谢了

呵呵！恐怕你没找到准确的原因，我们提质粒是为了使其中乙醇充分挥发，我们都在65温水中开盖溶半个小时，都没有明显降解，而你一手指头之功就如此之大，不靠谱！！！
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wuwei_hello@163.com
7楼2010-04-30 14:09:50
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
就是，你手上有那么多DNASE，那可以去卖了,我觉得你直接用水溶解～做个对照看看，RNASE一定要使劲的煮～希望对你有所帮助～
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8楼2010-04-30 16:02:11
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是觉得RNase里有DNase造成的吧，一般手指碰碰也没那么厉害。有时候还过夜敞盖干燥也没怎么降解
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终于熬成木虫了……
9楼2010-05-01 02:34:28
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fywjp

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wuweibewin at 2010-04-30 14:09:50:
呵呵！恐怕你没找到准确的原因，我们提质粒是为了使其中乙醇充分挥发，我们都在65温水中开盖溶半个小时，都没有明显降解，而你一手指头之功就如此之大，不靠谱！！！

DNase不会到处飞的，所以开盖放置时没有问题的，而一般手上都会有一些DNase，的确会造成质粒的降解，我就经历了这样一个例子，至少现在不降解了就是一个很好的说明
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10楼2010-05-01 09:39:05
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