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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

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[交流] 【求助/交流】如何提取不带质粒的细菌总DNA？

如题，实验需要所提取DNA不能带有质粒污染，不依赖细菌培养

这一目的能否达到？

最好能帮忙找到相关文献，必有重谢！

[ Last edited by tingspdf on 2011-2-25 at 21:14 ]

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1楼 2011-02-25 20:52:30

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

tingspdf(金币+1): 谢谢，不培养细菌的话能做吗 2011-02-25 21:14:33

先做质粒消除实验，然后培养不含质粒的菌，提取DNA

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2楼2011-02-25 21:12:10

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

tingspdf(金币+2): 能不能通过PFGE纯化所提取的总DNA，去掉分子量小的质粒DNA来达到目的？ 2011-02-25 21:45:18

，culture-independent 还不要质粒的不知道咋做。。。。

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3楼2011-02-25 21:17:15

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天使托

专家顾问 (职业作家)

★
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-02-25 21:35:10
tingspdf(金币+1): 谢谢 2011-02-25 21:45:25

先把质粒降解掉，然后再提取细菌基因组！

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4楼2011-02-25 21:29:40

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

★ ★ ★
tingspdf(金币+5): 谢谢，问题基本解决了，如果是cul-independ的话，是否可以做原位质粒消除实验？ 2011-02-25 22:07:01
lstt09nk(金币+3): 感谢参与 2011-02-26 08:55:47

引用回帖:

Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-25 21:17:15:

，culture-independent 还不要质粒的不知道咋做。。。。

呵呵，如果你提取的是环境样品总DNA的话，你会发现，脉冲场凝胶电泳结果也是smear的，因为它的分辨率高了，并不像是平常我们跑的那种，完整的一条23kb带。

所以这种方法基本上仍旧分不开总DNA和质粒。

再者，你culture-independent的话，质粒的丰度很低，跑电泳你都看不到质粒，何谈区分总DNA与质粒DNA呢？

[ Last edited by brightfuture01 on 2011-2-25 at 21:57 ]

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5楼2011-02-25 21:56:29

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