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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】如何提取不带质粒的细菌总DNA?

如题,实验需要所提取DNA不能带有质粒污染,不依赖细菌培养

这一目的能否达到?

最好能帮忙找到相关文献,必有重谢!

[ Last edited by tingspdf on 2011-2-25 at 21:14 ]
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tingspdf(金币+1): 谢谢,不培养细菌的话能做吗 2011-02-25 21:14:33
先做质粒消除实验,然后培养不含质粒的菌,提取DNA
2楼2011-02-25 21:12:10
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tingspdf(金币+2): 能不能通过PFGE纯化所提取的总DNA,去掉分子量小的质粒DNA来达到目的? 2011-02-25 21:45:18
,culture-independent 还不要质粒的不知道咋做。。。。
3楼2011-02-25 21:17:15
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lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-02-25 21:35:10
tingspdf(金币+1): 谢谢 2011-02-25 21:45:25
先把质粒降解掉,然后再提取细菌基因组!
4楼2011-02-25 21:29:40
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★ ★ ★
tingspdf(金币+5): 谢谢,问题基本解决了,如果是cul-independ的话,是否可以做原位质粒消除实验? 2011-02-25 22:07:01
lstt09nk(金币+3): 感谢参与 2011-02-26 08:55:47
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-25 21:17:15:
,culture-independent 还不要质粒的不知道咋做。。。。

呵呵,如果你提取的是环境样品总DNA的话,你会发现,脉冲场凝胶电泳结果也是smear的,因为它的分辨率高了,并不像是平常我们跑的那种,完整的一条23kb带。

所以这种方法基本上仍旧分不开总DNA和质粒。

再者,你culture-independent的话,质粒的丰度很低,跑电泳你都看不到质粒,何谈区分总DNA与质粒DNA呢?

[ Last edited by brightfuture01 on 2011-2-25 at 21:57 ]
5楼2011-02-25 21:56:29
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tingspdf(金币+1): 2011-02-26 19:53:24
不知道你这样做的目的是什么?一般二者很难不产生污染的。
6楼2011-02-26 10:26:52
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没有看到过有相关的质粒原位消除实验的文献哦。
7楼2011-02-26 10:48:38
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路人甲007

木虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
貌似见过一篇关于质粒消除的文献  楼主可以找找啊

[ Last edited by 路人甲007 on 2011-2-26 at 20:14 ]
8楼2011-02-26 20:10:05
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