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amaya1545

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】MTT法确定药物对细胞的作用浓度范围 结果如何分析

大家好，现在通过细胞，做MTT，筛选药物作用的浓度范围，有些问题不明白，想请教大家

   1. 不同药物浓度，  MTT 测OD值后，算出OD平均值，能否说 OD值小于空白对照的就是药物对细胞生长有抑制，大于空白对照的就是促进生长吗？ MTT是否要选出几乎对细胞没有影响的药物范围还是怎样？
   2. 抑制率为多大是，说明药物对细胞有毒性？
   3. 同1，选出的药物范围对细胞几乎没有影响（能说没有差异性嘛？），下面设置高中低浓度做进一步实验时，是否要药物对细胞作用没有差异性，这样要检测的指标才有意义？
   4. MTT结果，我看到有的进行了单因素分析，有必要吗？还是就浓度-抑制率做个曲线，求出IC50就好了？ 顺便弱弱的问问，IC50求出后，是否就代表2IC50就是药物的毒性浓度？

     关于MTT筛选浓度，还有什么我没有考虑到的，希望各位给提个意见，想尽早筛出浓度范围，进行下面实验，谢谢各位了

    期待各位的回答  急待。。。。。。。。
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1楼 2011-02-28 08:58:22
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amaya1545

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lijunhu at 2011-02-28 11:55:49:
MTT实验过程中，细胞增殖越多越快，则吸光度越高。细胞毒性越大

吸光度越高，细胞毒性越大？
  
  不是的吧   

  不过我现在知道怎么搞了  还是要谢谢你的
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8楼2011-03-01 15:28:32
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暗香ing

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by amaya1545 at 2011-03-01 15:28:32
吸光度越高，细胞毒性越大？
  
  不是的吧   

  不过我现在知道怎么搞了  还是要谢谢你的...

我觉得楼上说错了，增值率越大，毒性越小。
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17楼2013-05-01 19:16:24
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ninifeixiang

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 蝴蝶沧海 at 2011-12-16 22:18:03
请教下楼主，你是怎么筛选药物浓度的啊？我也遇到相同的问题~谢谢啦...

嗯嗯，IC50算出后，怎么确定药物最终作用浓度啊？
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19楼2013-07-01 10:11:26
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普通回帖

lijunhu

铜虫 (小有名气)
MTT实验过程中，细胞增殖越多越快，则吸光度越高。细胞毒性越大
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2楼2011-02-28 11:55:49
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cuier124

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 鼓励新虫交流， 2011-02-28 16:44:14
amaya1545(金币+2): 2011-02-28 23:02:24
引用回帖:
Originally posted by amaya1545 at 2011-02-28 08:58:22:
大家好，现在通过细胞，做MTT，筛选药物作用的浓度范围，有些问题不明白，想请教大家

   1. 不同药物浓度，  MTT 测OD值后，算出OD平均值，能否说 OD值小于空白对照的就是药物对细胞生长有抑制，大于空白对照的 ...

不用算IC50。
半数抑制浓度(IC50)指在用药后存活的细胞数量减少一半时所需的药物浓度。在MTT法中，就是以对照组吸光度OD值减少一半所需的药物浓度为Ic50，除此以外，半数抑制浓度的含义还相当于药物对培养细胞的最小致死剂量的平均值，作为反映药效的定量指标。
将对照组细胞存活率看做100%，药物各浓度组的细胞存活率与之比较，差别有显著性（P<0.05）说明对细胞存活有影响。药物各浓度组的细胞存活率=(各浓度组吸光值／对照组吸光值)×100％。
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3楼2011-02-28 14:36:44
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amaya1545

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cuier124 at 2011-02-28 14:36:44:
不用算IC50。
半数抑制浓度(IC50)指在用药后存活的细胞数量减少一半时所需的药物浓度。在MTT法中，就是以对照组吸光度OD值减少一半所需的药物浓度为Ic50，除此以外，半数抑制浓度的含义还相当于药物对培养细胞 ...

怎么算是否显著性差异呢？  网上介绍了很多 但是 不太会用

   我有7个不同浓度组，一个阳性对照，一个阴性对照，n=5 ，具体要怎么分析呢？谢谢
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4楼2011-02-28 23:17:04
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cuier124

金虫 (初入文坛)
amaya1545(金币+2): 2011-03-01 15:26:59
引用回帖:
Originally posted by amaya1545 at 2011-02-28 23:17:04:
怎么算是否显著性差异呢？  网上介绍了很多 但是 不太会用

   我有7个不同浓度组，一个阳性对照，一个阴性对照，n=5 ，具体要怎么分析呢？谢谢

你先把各组的细胞存活率算出来，药物各浓度组分别与空白对照组（不加任何药，正常培养的细胞）比较，用t检验法，SPSS软件可以分析，得得出的p值小于0.05时差异显著
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5楼2011-03-01 10:59:39
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w.king124

金虫 (正式写手)
问题一：MTT法主要用于线粒体活性测定，以此来判断对细胞的毒性要慎重，其他干扰呼吸链的其他影响因素也很多，造成MTT的吸收值下降
其他问题：是目前普遍做法
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6楼2011-03-01 11:16:25
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amaya1545

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cuier124 at 2011-03-01 10:59:39:
你先把各组的细胞存活率算出来，药物各浓度组分别与空白对照组（不加任何药，正常培养的细胞）比较，用t检验法，SPSS软件可以分析，得得出的p值小于0.05时差异显著

谢谢  我用的EXCELL的TTEXT  
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7楼2011-03-01 15:27:36
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amaya1545

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by w.king124 at 2011-03-01 11:16:25:
问题一：MTT法主要用于线粒体活性测定，以此来判断对细胞的毒性要慎重，其他干扰呼吸链的其他影响因素也很多，造成MTT的吸收值下降
其他问题：是目前普遍做法

恩  我只需晒出药物作用浓度范围   
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9楼2011-03-01 15:29:33
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蝴蝶沧海

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by amaya1545 at 2011-03-01 15:28:32:
吸光度越高，细胞毒性越大？
  
  不是的吧   

  不过我现在知道怎么搞了  还是要谢谢你的

请教下楼主，你是怎么筛选药物浓度的啊？我也遇到相同的问题~谢谢啦
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10楼2011-12-16 22:18:03
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shenqushen

木虫 (正式写手)
studying
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11楼2012-05-16 03:51:13
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shenqushen

木虫 (正式写手)
studying
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12楼2012-05-16 03:53:34
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shenqushen

木虫 (正式写手)
studying
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13楼2012-05-16 04:27:29
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YBY123

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也出现相同的问题了，就是caco-2细胞的给药浓度、给药时间的确定，请教各位，，，谢谢
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14楼2012-06-27 09:00:40
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斯斯0704

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我查到我要做的药物和细胞的IC50值怎么设置药物浓度啊？
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15楼2012-11-21 16:43:59
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863361387

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
46814楼: Originally posted by lijunhu at 2011-02-28 11:55:49
MTT实验过程中，细胞增殖越多越快，则吸光度越高。细胞毒性越大

楼主确定没有支错招
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16楼2013-04-03 07:28:42
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nmhsd

木虫 (正式写手)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-01 10:24:12
MTT法很粗放，多设复空。有时不得不说，细胞活力（对照），药物孵育时间均影响测得结果，一定要注意RSD的大小。总体讲单因素方差检验看药物到底有没有作用（既然是药，一般是有显著的），其次是剂量反应曲线。后者的关键是选好药物浓度。如果比较一系列药物类似物的活性，MTT法还是很不错的。
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18楼2013-05-02 11:38:42
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eachen5

至尊木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
IC50算出后，怎么确定药物最终作用浓度啊？
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20楼2014-03-12 09:12:18
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吴迪2011

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by amaya1545 at 2011-03-01 15:28:32
吸光度越高，细胞毒性越大？
  
  不是的吧   

  不过我现在知道怎么搞了  还是要谢谢你的...

楼主想问您一下，二样本分别求出IC50值后，还需要进行显著性分析吗？
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21楼2015-11-09 15:33:03
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孙意冉幻听

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，我也准备做药物毒性检测的MTT实验，能否交流一下？我qq：1079412629，你留下你的联系方式也行，谢谢了
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22楼2016-02-29 19:45:02
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