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淋巴细胞增殖实验(MTT法)中的几个问题
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本人之前曾经做过淋巴细胞转化实验,用的是自己配制的培养基,这次再做之后,发现淋巴细胞始终无法被转化成淋巴母细胞,原因无法找出,有知道原因者能否告之,不胜感激!具体实验步骤如下: 1.取18-22克小白鼠脾淋巴细胞,调整浓度为2*10的六次方,其它浓度也有做,但是也未能获得成功。加入96孔板,每孔100ul,加入CONA或PHA 50ul,CON A终浓度分别为5,10,20ug/ML,PHA终浓度分别为10,20,40ug/ml.加入含10%小牛血清的1640培养基50ul. 2.以加入100ul细胞悬液和100ul含10%小牛血清作为空白对照 3.96孔板分别加入100ul细胞悬液,50ul实验药物溶液和50ul含10%小牛血清的1640. 4.于37度,5%CO2培养72小时,加入MTT(5mg/ml)20ul,培养4小时后进行OD570测定。 淋巴细胞始终未能被转化为淋巴母细胞,原因未能找到,是实验动物的问题,还是培养基的问题,还是刺激源的问题?哪位前辈能够指点迷津,谢谢了! |
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mafang68
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
summer0702(金币+3): 谢谢你的意见!分离时你也是用PBS的吗?不是用Hank's?;有没有遇到MTT不能被PBS溶解的问题! 2011-08-16 10:04:46
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流 2011-08-16 10:33:21
summer0702(金币+2): 2011-09-17 16:11:35
summer0702(金币+3): 谢谢你的意见!分离时你也是用PBS的吗?不是用Hank's?;有没有遇到MTT不能被PBS溶解的问题! 2011-08-16 10:04:46
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流 2011-08-16 10:33:21
summer0702(金币+2): 2011-09-17 16:11:35
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我以前做过淋巴细胞的增殖试验,主要心得在于分离提取的细胞状态好,试验就做的好。跟你交流一下经验: 1.小鼠,我用的是C57,小白鼠主要是体液应答为主 2.培养的血清,用的是10%胎牛的 3.分离细胞尤其要注意,快,快,再快!尽量减少细胞在外界的时间。分离时用的PBS也是加了血清的 4.还有一条最关键,培养时细胞的浓度,我做的没有低于1*107,淋巴细胞小,多点没关系 |

2楼2011-08-16 09:41:49
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mafang68
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