| 查看: 2360 | 回复: 5 | |||
[求助]
淋巴细胞增殖实验（MTT法）中的几个问题
|
|
本人之前曾经做过淋巴细胞转化实验，用的是自己配制的培养基，这次再做之后，发现淋巴细胞始终无法被转化成淋巴母细胞，原因无法找出，有知道原因者能否告之，不胜感激！具体实验步骤如下： 1.取18-22克小白鼠脾淋巴细胞，调整浓度为2*10的六次方，其它浓度也有做，但是也未能获得成功。加入96孔板，每孔100ul,加入CONA或PHA 50ul，CON A终浓度分别为5,10,20ug/ML，PHA终浓度分别为10,20,40ug/ml.加入含10%小牛血清的1640培养基50ul. 2.以加入100ul细胞悬液和100ul含10%小牛血清作为空白对照 3.96孔板分别加入100ul细胞悬液,50ul实验药物溶液和50ul含10%小牛血清的1640. 4.于37度，5%CO2培养72小时，加入MTT（5mg/ml)20ul,培养4小时后进行OD570测定。 淋巴细胞始终未能被转化为淋巴母细胞，原因未能找到，是实验动物的问题，还是培养基的问题，还是刺激源的问题？哪位前辈能够指点迷津，谢谢了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
280求调剂
已经有3人回复
-
085400 328分 求调剂
已经有7人回复
-
材料专硕322
已经有12人回复
-
一志愿华中农微生物，288分，三年实验经历
已经有3人回复
-
314求调剂
已经有14人回复
-
调剂 化学 307
已经有11人回复
-
化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文
已经有10人回复
-
材料299专硕求调剂
已经有5人回复
-
083200 初试305分 求调剂
已经有10人回复
-
332，085601求调剂
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- eIF4E抑制剂4EGI-1的研究进展
已经有1人回复
- Abl和Src激酶抑制剂Dasatinib的生物活性的研究
已经有0人回复
- Btk抑制剂Ibrutinib的相关研究
已经有0人回复
- 靶点JAK及其抑制剂CP-690550的研究
已经有3人回复
- 碘酸钾强制过量补碘对免疫系统的影响
已经有1人回复
- 《实验医学》JEM March 2013 文章精选(附全文下载)
已经有0人回复
- 学科分类求助---医学类
已经有4人回复
mafang68
金虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1109.5
- 散金: 1500
- 红花: 6
- 沙发: 2
- 帖子: 1698
- 在线: 441.8小时
- 虫号: 1065158
- 注册: 2010-07-27
- 性别: MM
- 专业: 免疫生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
summer0702(金币+3): 谢谢你的意见！分离时你也是用PBS的吗？不是用Hank's?；有没有遇到MTT不能被PBS溶解的问题！ 2011-08-16 10:04:46
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流 2011-08-16 10:33:21
summer0702(金币+2): 2011-09-17 16:11:35
summer0702(金币+3): 谢谢你的意见！分离时你也是用PBS的吗？不是用Hank's?；有没有遇到MTT不能被PBS溶解的问题！ 2011-08-16 10:04:46
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流 2011-08-16 10:33:21
summer0702(金币+2): 2011-09-17 16:11:35
|
我以前做过淋巴细胞的增殖试验，主要心得在于分离提取的细胞状态好，试验就做的好。跟你交流一下经验： 1.小鼠，我用的是C57，小白鼠主要是体液应答为主 2.培养的血清，用的是10%胎牛的 3.分离细胞尤其要注意，快，快，再快！尽量减少细胞在外界的时间。分离时用的PBS也是加了血清的 4.还有一条最关键，培养时细胞的浓度，我做的没有低于1*107，淋巴细胞小，多点没关系 |
2楼2011-08-16 09:41:49
3楼2011-08-16 10:06:41
mafang68
金虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1109.5
- 散金: 1500
- 红花: 6
- 沙发: 2
- 帖子: 1698
- 在线: 441.8小时
- 虫号: 1065158
- 注册: 2010-07-27
- 性别: MM
- 专业: 免疫生物学
4楼2011-08-16 10:10:14
5楼2011-08-16 10:14:35
6楼2011-08-16 22:30:36
