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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酵母PRS整合表达质粒使用的问题，我需要你的帮助，谢谢
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酵母PRS整合表达质粒使用的问题，我需要你的帮助，谢谢 已有4人参与

我想在营养缺陷型酵母CEN.PK2-1C(MATa; ura3-52; trp1-289; leu2-3,112; his3Δ 1; MAL2-8C; SUC2)中整合表达几个基因，手头有pRS303，pRS304,pRS305，pRS306等质粒。

我现在存在一个很大的疑惑，即：我能不能先用其中一个质粒（假设为pRS303）表达一个基因，构建一株菌，命名A吧。我是不是可以继续使用另外三个质粒，继续整合表达新的基因到A中，这样最后，我可以在一株菌内，整合表达四个基因了。

这个问题的疑惑之处在于，我不是很确定，在后一个基因表达后，会不会破坏前面整合上去的基因呢？

谢谢大家，这个问题对我很重要，请不吝赐教。
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1楼 2011-04-05 20:19:32
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
刚刚查了下你系统的信息，pRS303，pRS304,pRS305，pRS306的筛选标记分别是His，TRP，LEU，URA，分别与宿主的营养缺陷型互补，所以筛选标记方面不存在什么问题，可以实现你的实验目的。
另外不知道你整合位点是怎么选择的，
如果担心后一个基因整合会影响前一个基因，你可以全部选在筛选标记处将载体线性化，那么整合整合分别选择His，TRP，LEU，URA，这样的话就不冲突了。
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Thank-you，so-blue.
2楼2011-04-12 16:49:37
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)
谢谢您，非常感谢。具体的我查阅了质粒的原始文献，是单交换，故是没有影响的，非常感谢您
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3楼2011-06-02 14:51:50
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z-w-p

新虫 (初入文坛)
请问楼主，能分享一下关于pRS303系列的原始文献么，在下也很困扰这个问题，万分感谢啊
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4楼2012-02-14 09:38:50
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

西瓜(金币+2): 不迟哈~鼓励热心的朋友！ 2012-02-15 22:20:18
引用回帖:
楼: Originally posted by z-w-p at 2012-02-14 09:38:50:
请问楼主，能分享一下关于pRS303系列的原始文献么，在下也很困扰这个问题，万分感谢啊

实在对不起，我很久没来了，刚看到，赶紧第一时间回复你，我不知道能不能上传附件，文章名字是‘A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for efficient manipulation of DNA in Saccharomyces cerevisiae’。以后遇到类似的质粒不明确的事情，可以直接到NCBI上找这个质粒的原始文献（注意Title和Journal）
LOCUS       PRS304                  4267 bp    DNA     circular SYN 14-SEP-1995
DEFINITION  Yeast integrative vector pRS304 with TRP1 marker, complete
            sequence.
ACCESSION   U03436
VERSION     U03436.1  GI:416305
KEYWORDS    .
SOURCE      Cloning vector pRS304
  ORGANISM  Cloning vector pRS304
            other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE   1  (bases 1 to 4267)
  AUTHORS   Sikorski,R.S. and Hieter,P.
  TITLE     A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for
            efficient manipulation of DNA in Saccharomyces cerevisiae
  JOURNAL   Genetics 122 (1), 19-27 (1989)
实在抱歉，回复迟了，希望能对你用，祝进步
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z-w-p
5楼2012-02-15 18:56:14
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z-w-p

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuan6126 at 2012-02-15 18:56:14:
实在对不起，我很久没来了，刚看到，赶紧第一时间回复你，我不知道能不能上传附件，文章名字是‘A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for efficient manipulation of DNA in Saccharom ...

非常感谢楼主，文章已经找到了。还有一点小问题想向您请教，这系列质粒整合到染色体上时是什么位点整合的？文章中质粒和染色体上同源的L和R是基因组上的随机序列还是某一个特定序列？非常感谢，也祝您诸事顺心
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6楼2012-02-15 20:54:38
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原野漫漫

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
7楼2012-06-14 16:40:41
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fanchuyao
8楼2015-09-28 22:04:49
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