应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酵母PRS整合表达质粒使用的问题，我需要你的帮助，谢谢
81/1返回列表
查看: 3552  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酵母PRS整合表达质粒使用的问题，我需要你的帮助，谢谢 已有4人参与

我想在营养缺陷型酵母CEN.PK2-1C(MATa; ura3-52; trp1-289; leu2-3,112; his3Δ 1; MAL2-8C; SUC2)中整合表达几个基因，手头有pRS303，pRS304,pRS305，pRS306等质粒。

我现在存在一个很大的疑惑，即：我能不能先用其中一个质粒（假设为pRS303）表达一个基因，构建一株菌，命名A吧。我是不是可以继续使用另外三个质粒，继续整合表达新的基因到A中，这样最后，我可以在一株菌内，整合表达四个基因了。

这个问题的疑惑之处在于，我不是很确定，在后一个基因表达后，会不会破坏前面整合上去的基因呢？

谢谢大家，这个问题对我很重要，请不吝赐教。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-04-05 20:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
刚刚查了下你系统的信息，pRS303，pRS304,pRS305，pRS306的筛选标记分别是His，TRP，LEU，URA，分别与宿主的营养缺陷型互补，所以筛选标记方面不存在什么问题，可以实现你的实验目的。
另外不知道你整合位点是怎么选择的，
如果担心后一个基因整合会影响前一个基因，你可以全部选在筛选标记处将载体线性化，那么整合整合分别选择His，TRP，LEU，URA，这样的话就不冲突了。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2011-04-12 16:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)
谢谢您，非常感谢。具体的我查阅了质粒的原始文献，是单交换，故是没有影响的，非常感谢您
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-02 14:51:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z-w-p

新虫 (初入文坛)
请问楼主，能分享一下关于pRS303系列的原始文献么，在下也很困扰这个问题，万分感谢啊
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-14 09:38:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

西瓜(金币+2): 不迟哈~鼓励热心的朋友！ 2012-02-15 22:20:18
引用回帖:
楼: Originally posted by z-w-p at 2012-02-14 09:38:50:
请问楼主，能分享一下关于pRS303系列的原始文献么，在下也很困扰这个问题，万分感谢啊

实在对不起，我很久没来了，刚看到，赶紧第一时间回复你，我不知道能不能上传附件，文章名字是‘A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for efficient manipulation of DNA in Saccharomyces cerevisiae’。以后遇到类似的质粒不明确的事情，可以直接到NCBI上找这个质粒的原始文献（注意Title和Journal）
LOCUS       PRS304                  4267 bp    DNA     circular SYN 14-SEP-1995
DEFINITION  Yeast integrative vector pRS304 with TRP1 marker, complete
            sequence.
ACCESSION   U03436
VERSION     U03436.1  GI:416305
KEYWORDS    .
SOURCE      Cloning vector pRS304
  ORGANISM  Cloning vector pRS304
            other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE   1  (bases 1 to 4267)
  AUTHORS   Sikorski,R.S. and Hieter,P.
  TITLE     A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for
            efficient manipulation of DNA in Saccharomyces cerevisiae
  JOURNAL   Genetics 122 (1), 19-27 (1989)
实在抱歉，回复迟了，希望能对你用，祝进步
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

z-w-p
5楼2012-02-15 18:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z-w-p

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuan6126 at 2012-02-15 18:56:14:
实在对不起，我很久没来了，刚看到，赶紧第一时间回复你，我不知道能不能上传附件，文章名字是‘A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for efficient manipulation of DNA in Saccharom ...

非常感谢楼主，文章已经找到了。还有一点小问题想向您请教，这系列质粒整合到染色体上时是什么位点整合的？文章中质粒和染色体上同源的L和R是基因组上的随机序列还是某一个特定序列？非常感谢，也祝您诸事顺心
赞一下 回复此楼
6楼2012-02-15 20:54:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原野漫漫

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
7楼2012-06-14 16:40:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanchuyao
8楼2015-09-28 22:04:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuan6126 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-15 7/350 2026-03-16 09:43 by 闲人终南山
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +12 enenenhui 2026-03-13 13/650 2026-03-16 08:30 by Linda Hu
[考研] 化学调剂0703 +7 啊我我的 2026-03-11 7/350 2026-03-15 23:03 by 凌千颂111
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[基金申请] 面上和青基一样限30页不合理 +5 wowsunflower 2026-03-10 7/350 2026-03-14 17:21 by kingkocxr
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 求调剂，一志愿江南大学环境工程085701 +3 Djdjj12 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:31 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 求调剂（材料与化工327） +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭