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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酵母PRS整合表达质粒使用的问题,我需要你的帮助,谢谢 已有4人参与

我想在营养缺陷型酵母CEN.PK2-1C(MATa; ura3-52; trp1-289; leu2-3,112; his3Δ 1; MAL2-8C; SUC2)中整合表达几个基因,手头有pRS303,pRS304,pRS305,pRS306等质粒。

我现在存在一个很大的疑惑,即:我能不能先用其中一个质粒(假设为pRS303)表达一个基因,构建一株菌,命名A吧。我是不是可以继续使用另外三个质粒,继续整合表达新的基因到A中,这样最后,我可以在一株菌内,整合表达四个基因了。

这个问题的疑惑之处在于,我不是很确定,在后一个基因表达后,会不会破坏前面整合上去的基因呢?

谢谢大家,这个问题对我很重要,请不吝赐教。
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
刚刚查了下你系统的信息,pRS303,pRS304,pRS305,pRS306的筛选标记分别是His,TRP,LEU,URA,分别与宿主的营养缺陷型互补,所以筛选标记方面不存在什么问题,可以实现你的实验目的。
另外不知道你整合位点是怎么选择的,
如果担心后一个基因整合会影响前一个基因,你可以全部选在筛选标记处将载体线性化,那么整合整合分别选择His,TRP,LEU,URA,这样的话就不冲突了。
Thank-you,so-blue.
2楼2011-04-12 16:49:37
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

谢谢您,非常感谢。具体的我查阅了质粒的原始文献,是单交换,故是没有影响的,非常感谢您
3楼2011-06-02 14:51:50
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z-w-p

新虫 (初入文坛)

请问楼主,能分享一下关于pRS303系列的原始文献么,在下也很困扰这个问题,万分感谢啊
4楼2012-02-14 09:38:50
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)


西瓜(金币+2): 不迟哈~鼓励热心的朋友! 2012-02-15 22:20:18
引用回帖:
: Originally posted by z-w-p at 2012-02-14 09:38:50:
请问楼主,能分享一下关于pRS303系列的原始文献么,在下也很困扰这个问题,万分感谢啊

实在对不起,我很久没来了,刚看到,赶紧第一时间回复你,我不知道能不能上传附件,文章名字是‘A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for efficient manipulation of DNA in Saccharomyces cerevisiae’。以后遇到类似的质粒不明确的事情,可以直接到NCBI上找这个质粒的原始文献(注意Title和Journal)
LOCUS       PRS304                  4267 bp    DNA     circular SYN 14-SEP-1995
DEFINITION  Yeast integrative vector pRS304 with TRP1 marker, complete
            sequence.
ACCESSION   U03436
VERSION     U03436.1  GI:416305
KEYWORDS    .
SOURCE      Cloning vector pRS304
  ORGANISM  Cloning vector pRS304
            other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE   1  (bases 1 to 4267)
  AUTHORS   Sikorski,R.S. and Hieter,P.
  TITLE     A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for
            efficient manipulation of DNA in Saccharomyces cerevisiae
  JOURNAL   Genetics 122 (1), 19-27 (1989)
实在抱歉,回复迟了,希望能对你用,祝进步

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5楼2012-02-15 18:56:14
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z-w-p

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuan6126 at 2012-02-15 18:56:14:
实在对不起,我很久没来了,刚看到,赶紧第一时间回复你,我不知道能不能上传附件,文章名字是‘A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for efficient manipulation of DNA in Saccharom ...

非常感谢楼主,文章已经找到了。还有一点小问题想向您请教,这系列质粒整合到染色体上时是什么位点整合的?文章中质粒和染色体上同源的L和R是基因组上的随机序列还是某一个特定序列?非常感谢,也祝您诸事顺心
6楼2012-02-15 20:54:38
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原野漫漫

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

7楼2012-06-14 16:40:41
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8楼2015-09-28 22:04:49
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