应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 酵母双杂求助-质粒在酵母中的表达（Gal4系统）
51/1返回列表
查看: 2155  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qingfeng2011

金虫 (正式写手)

[求助] 酵母双杂求助-质粒在酵母中的表达（Gal4系统） 已有4人参与

亲爱的各位虫友，本人最近在做酵母双杂验证两个蛋白的互作，是将2个质粒依次转到AH109 中的，所用载体为pGBKT7 和pGADT7。在缺色氨酸和亮氨酸的SD培养基上能长出单菌落，并且PCR验证两个质粒都已转入。但是四缺板加JA-Ile（只有加入这种物质才可发生互作）后并没有菌落生长。
对于这种原因，自己也进行了以下分析，可能 蛋白并没有表达。但是有一篇Nature就做出来了，只不过我们用的载体的差别在于他们用的是Gateway系统，我们是普通的载体，载体名称都是一样的。非常困惑，请各位虫友帮忙解答！万分感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-12-20 23:30:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你检测一下你的插入片段读码框是否改变。
赞一下 回复此楼
hehe
2楼2014-12-21 08:47:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

君酷

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR怎么能确定是否转入？不转入难道就P不出来了吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-12-21 10:24:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这两个载体中都有标签的吧，而且标签和你的目的蛋白是融合的，你抽提蛋白做下western看下你的蛋白有没有表达就OK了，还有，做双杂的时候带上正对照，这样就可以知道是否是你的双杂系统有问题了。从这两个方面找问题吧。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-12-22 19:57:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

enhen122333

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的茉莉酸异亮氨酸从哪里买的？
赞一下 回复此楼
5楼2016-07-02 15:06:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员b4d7tX 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭