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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

[求助] 酵母双杂-转完质粒的酵母在一缺液体培养基上不长??? 已有1人参与

各位虫友好:
       最近在用泛素化酵母双杂系统筛选互作蛋白,用的菌株是NMY32,当把Bait载体转进去后,在SD-LEU的板子(PH=5.8)上长出克隆,两三天后能到2-3mm,但挑克隆划线后转到液体的培养基上(自然PH值),30度,200rpm,摇了快两天了,OD600到了0.3左右就再也不增加了,连续挑了好几个克隆都是如此,不知道有没有虫友用过这套体系,是否也碰到过类似的问题?请多多指教
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jiayoubashaonian
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javerson112

新虫 (初入文坛)

我现在也遇到这个问题。我把pGBKT7空载体和连着我的基因的重组载体,转化到AH109,在-Trp的固体培养基上能长,但是在-Trp的液体培养基上,摇16-20小时,都几乎不生长,培养基还是清澈的。 你的问题是怎么解决的啊?
2楼2012-09-22 10:01:20
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by javerson112 at 2012-09-22 10:01:20
我现在也遇到这个问题。我把pGBKT7空载体和连着我的基因的重组载体,转化到AH109,在-Trp的固体培养基上能长,但是在-Trp的液体培养基上,摇16-20小时,都几乎不生长,培养基还是清澈的。 你的问题是怎么解决的啊?

您好,我们当时是培养基的问题,看一下酵母氮源是不是需要加硫酸铵!
jiayoubashaonian
3楼2012-09-22 11:48:59
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javerson112

新虫 (初入文坛)

我买的是clontech公司的各种缺陷型培养基,现成的,不用自己配。应该不是培养基的问题吧
4楼2012-09-22 21:58:06
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by javerson112 at 2012-09-22 21:58:06
我买的是clontech公司的各种缺陷型培养基,现成的,不用自己配。应该不是培养基的问题吧

是不是酵母成团了?
jiayoubashaonian
5楼2012-09-23 10:18:45
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匆匆旅者

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by javerson112 at 2012-09-22 10:01:20
我现在也遇到这个问题。我把pGBKT7空载体和连着我的基因的重组载体,转化到AH109,在-Trp的固体培养基上能长,但是在-Trp的液体培养基上,摇16-20小时,都几乎不生长,培养基还是清澈的。 你的问题是怎么解决的啊?

你好,不知道你能不能给我点AH109菌株,我也做酵母双杂交,可惜一直没有找到需要的菌种,帮帮忙咯!
生活就像一盒巧克力,你永远不知道下一颗是什么味道。
6楼2012-12-16 11:06:31
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lingling0629

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

各位好,我也遇到了这样的情况,我转了目的基因后,在SD-Ura质粒筛选培养基上长得还行,挑了克隆做菌液PCR,还送去测序了,用测序正确的酵母转化子用YPDA划线后,挑单克隆后用液体SD-Ura摇菌,转化空载的可以长出来,转了基因的酵母却摇不出来,不知道是为什么,有人告诉我说是载体有毒性,不知道是不是,求各位大神给点意见,谢谢!
7楼2014-10-15 15:06:03
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13345129835

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lingling0629 at 2014-10-15 15:06:03
各位好,我也遇到了这样的情况,我转了目的基因后,在SD-Ura质粒筛选培养基上长得还行,挑了克隆做菌液PCR,还送去测序了,用测序正确的酵母转化子用YPDA划线后,挑单克隆后用液体SD-Ura摇菌,转化空载的可以长出来 ...

不知道您的问题解决了没
8楼2015-12-02 09:02:25
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茹茹茹小刺

新虫 (小有名气)

我也遇到了相似的问题,求问题主和各位虫友是如何解决的?
9楼2018-07-15 18:46:04
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