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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母双杂-转完质粒的酵母在一缺液体培养基上不长？？？
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

[求助] 酵母双杂-转完质粒的酵母在一缺液体培养基上不长？？？ 已有1人参与

各位虫友好:
       最近在用泛素化酵母双杂系统筛选互作蛋白，用的菌株是NMY32，当把Bait载体转进去后，在SD-LEU的板子（PH=5.8)上长出克隆，两三天后能到2-3mm，但挑克隆划线后转到液体的培养基上(自然PH值），30度，200rpm，摇了快两天了，OD600到了0.3左右就再也不增加了，连续挑了好几个克隆都是如此，不知道有没有虫友用过这套体系，是否也碰到过类似的问题？请多多指教
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jiayoubashaonian
1楼 2012-03-06 17:48:16
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lingling0629

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

各位好，我也遇到了这样的情况，我转了目的基因后，在SD-Ura质粒筛选培养基上长得还行，挑了克隆做菌液PCR，还送去测序了，用测序正确的酵母转化子用YPDA划线后，挑单克隆后用液体SD-Ura摇菌，转化空载的可以长出来，转了基因的酵母却摇不出来，不知道是为什么，有人告诉我说是载体有毒性，不知道是不是，求各位大神给点意见，谢谢！
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7楼2014-10-15 15:06:03
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javerson112

新虫 (初入文坛)
我现在也遇到这个问题。我把pGBKT7空载体和连着我的基因的重组载体，转化到AH109，在-Trp的固体培养基上能长，但是在-Trp的液体培养基上，摇16-20小时，都几乎不生长，培养基还是清澈的。 你的问题是怎么解决的啊？
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2楼2012-09-22 10:01:20
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by javerson112 at 2012-09-22 10:01:20
我现在也遇到这个问题。我把pGBKT7空载体和连着我的基因的重组载体，转化到AH109，在-Trp的固体培养基上能长，但是在-Trp的液体培养基上，摇16-20小时，都几乎不生长，培养基还是清澈的。 你的问题是怎么解决的啊？

您好，我们当时是培养基的问题，看一下酵母氮源是不是需要加硫酸铵！
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jiayoubashaonian
3楼2012-09-22 11:48:59
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javerson112

新虫 (初入文坛)
我买的是clontech公司的各种缺陷型培养基，现成的，不用自己配。应该不是培养基的问题吧
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4楼2012-09-22 21:58:06
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