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kernim

金虫 (正式写手)

[求助] 酵母双杂找出目的蛋白的互作蛋白后进一步实验该做什么?求教!

我是超级菜鸟,现在研究一个膜蛋白,通过酵母双杂找到了他的一个互作蛋白了,也验证了,进一步实验就不知道干啥了,实验室资源有限,求教网上大虾,给指条明路吧~!
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-11-21 08:27:43
可以看一下敲除你的互作蛋白,对你的膜蛋白有什么影响。在互作蛋白的突变型中,膜蛋白有什么变化?
而且酵母双杂的假阳性很高,最好在你原来的研究的生物系统中再验证一下,像FRET,BiFC,共沉淀等等。主要还是看你的膜蛋白有什么功能,那个互作蛋白又是什么,能够给你的膜蛋白带来什么变化,你把这种互作的功能研究一下,也能就能知道你的膜蛋白的部分作用了。

信息太少了,水平所限,没法给你更多的建议。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2013-11-21 00:50:13
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kernim

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sun_in_night at 2013-11-21 00:50:13
可以看一下敲除你的互作蛋白,对你的膜蛋白有什么影响。在互作蛋白的突变型中,膜蛋白有什么变化?
而且酵母双杂的假阳性很高,最好在你原来的研究的生物系统中再验证一下,像FRET,BiFC,共沉淀等等。主要还是看你 ...

哦哦,做定点突变研究结合位点什么的,或者蛋白诱导 pull down呢   我还是不太明白pull down到底是用来干嘛的
验证我已经在准备做了,想做BifC,我想你给的敲除互作蛋白的建议很好,我会再看下相关的文献研究下的
O(∩_∩)O谢谢
3楼2013-11-25 20:09:22
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kernim

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by sun_in_night at 2013-11-21 00:50:13
可以看一下敲除你的互作蛋白,对你的膜蛋白有什么影响。在互作蛋白的突变型中,膜蛋白有什么变化?
而且酵母双杂的假阳性很高,最好在你原来的研究的生物系统中再验证一下,像FRET,BiFC,共沉淀等等。主要还是看你 ...

非常感谢!
4楼2014-01-04 18:50:05
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-07 08:53:05
引用回帖:
3楼: Originally posted by kernim at 2013-11-25 00:09:22
哦哦,做定点突变研究结合位点什么的,或者蛋白诱导 pull down呢   我还是不太明白pull down到底是用来干嘛的
验证我已经在准备做了,想做BifC,我想你给的敲除互作蛋白的建议很好,我会再看下相关的文献研究下的 ...

IP也就是pull down就是纯化一个蛋白,同时也能把其相互作用(一般得是物理结合,相互作用很强的那种)的蛋白一起纯化下来。然后用WB去检测。但对于蛋白修饰,或相互作用不是很强的IP不是很好的方法。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2014-01-05 23:31:49
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kernim

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by sun_in_night at 2014-01-05 23:31:49
IP也就是pull down就是纯化一个蛋白,同时也能把其相互作用(一般得是物理结合,相互作用很强的那种)的蛋白一起纯化下来。然后用WB去检测。但对于蛋白修饰,或相互作用不是很强的IP不是很好的方法。...

哦,好  谢谢
6楼2014-01-08 17:47:48
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