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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 酵母双杂找出目的蛋白的互作蛋白后进一步实验该做什么？求教！
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kernim

金虫 (正式写手)

[求助] 酵母双杂找出目的蛋白的互作蛋白后进一步实验该做什么？求教！

我是超级菜鸟，现在研究一个膜蛋白，通过酵母双杂找到了他的一个互作蛋白了，也验证了，进一步实验就不知道干啥了，实验室资源有限，求教网上大虾，给指条明路吧~！
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1楼 2013-11-20 22:11:52
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-21 08:27:43
可以看一下敲除你的互作蛋白，对你的膜蛋白有什么影响。在互作蛋白的突变型中，膜蛋白有什么变化？
而且酵母双杂的假阳性很高，最好在你原来的研究的生物系统中再验证一下，像FRET，BiFC，共沉淀等等。主要还是看你的膜蛋白有什么功能，那个互作蛋白又是什么，能够给你的膜蛋白带来什么变化，你把这种互作的功能研究一下，也能就能知道你的膜蛋白的部分作用了。

信息太少了，水平所限，没法给你更多的建议。
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kernim
2楼2013-11-21 00:50:13
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kernim

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sun_in_night at 2013-11-21 00:50:13
可以看一下敲除你的互作蛋白，对你的膜蛋白有什么影响。在互作蛋白的突变型中，膜蛋白有什么变化？
而且酵母双杂的假阳性很高，最好在你原来的研究的生物系统中再验证一下，像FRET，BiFC，共沉淀等等。主要还是看你 ...

哦哦，做定点突变研究结合位点什么的，或者蛋白诱导 pull down呢   我还是不太明白pull down到底是用来干嘛的
验证我已经在准备做了，想做BifC，我想你给的敲除互作蛋白的建议很好，我会再看下相关的文献研究下的
O(∩_∩)O谢谢
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3楼2013-11-25 20:09:22
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kernim

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by sun_in_night at 2013-11-21 00:50:13
可以看一下敲除你的互作蛋白，对你的膜蛋白有什么影响。在互作蛋白的突变型中，膜蛋白有什么变化？
而且酵母双杂的假阳性很高，最好在你原来的研究的生物系统中再验证一下，像FRET，BiFC，共沉淀等等。主要还是看你 ...

非常感谢！
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4楼2014-01-04 18:50:05
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sun_in_night

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-07 08:53:05
引用回帖:
3楼: Originally posted by kernim at 2013-11-25 00:09:22
哦哦，做定点突变研究结合位点什么的，或者蛋白诱导 pull down呢   我还是不太明白pull down到底是用来干嘛的
验证我已经在准备做了，想做BifC，我想你给的敲除互作蛋白的建议很好，我会再看下相关的文献研究下的 ...

IP也就是pull down就是纯化一个蛋白，同时也能把其相互作用（一般得是物理结合，相互作用很强的那种）的蛋白一起纯化下来。然后用WB去检测。但对于蛋白修饰，或相互作用不是很强的IP不是很好的方法。
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kernim
5楼2014-01-05 23:31:49
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kernim

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by sun_in_night at 2014-01-05 23:31:49
IP也就是pull down就是纯化一个蛋白，同时也能把其相互作用（一般得是物理结合，相互作用很强的那种）的蛋白一起纯化下来。然后用WB去检测。但对于蛋白修饰，或相互作用不是很强的IP不是很好的方法。...

哦，好  谢谢
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6楼2014-01-08 17:47:48
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