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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母双杂mating后显色问题
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sanbanwu

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母双杂mating后显色问题 已有2人参与

大家好，这半年一直在做酵母双杂，真是纠结啊，前几天终于可以mating 了，四缺板子上长得菌有160多个，将它们转接到涂x-gal的板子后，3天了，菌长得都很好，但是没有一个显蓝色，这是为什么啊，难道都是假阳性的？有谁做过这个的帮帮忙。。。
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1楼 2012-11-29 17:04:35
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向日葵的足迹

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
显不显蓝色和互作与否没有关系吧?
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2楼2012-11-29 19:54:34
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chong889988

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2012-12-22 19:01:54
一 可能两个蛋白真的不相互作用 二  涂布了X-GAL的四缺板放置于光下常温过久失效  三 RNA提取不好问题反转录后没有产生你需要的片段  当然还有其他很多原因的  我以前做了14个基因的cDNA作为诱饵 只有两个出现蓝色平板
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3楼2012-11-30 17:03:24
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sanbanwu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chong889988 at 2012-11-30 17:03:24
一 可能两个蛋白真的不相互作用 二  涂布了X-GAL的四缺板放置于光下常温过久失效  三 RNA提取不好问题反转录后没有产生你需要的片段  当然还有其他很多原因的  我以前做了14个基因的cDNA作为诱饵 只有两个出现蓝色平 ...

在划线的时候，大概用了差不多两个小时，难道真的是x-gal见光失效了？
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4楼2012-12-02 14:13:47
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chong889988

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by sanbanwu at 2012-12-02 14:13:47
在划线的时候，大概用了差不多两个小时，难道真的是x-gal见光失效了？...

两个小时应该没问题，存放的时候在-20度就ok，还有配置没问题的话， 你可以PCR验证下你的诱饵基因是否还在酵母菌中AH109中的BD载体上。文库酵母菌是否存在cDNA判断，如果上述几步没问题，我想应该是这两个蛋白真的不相互作用。
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5楼2012-12-22 09:08:43
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suanzhaner

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

直接涂板看蓝白斑的应该用X-a-gal，beta-半乳糖苷酶不分泌，必须裂解酵母才能进行x-gal的蓝白斑筛选。
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6楼2014-03-11 19:10:26
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GAATTC

新虫 (初入文坛)
你好！
    我刚开始准备，想请教你几个问题，你是从文库中筛选的吗？那你的文库是以Y187酵母菌的形式保存的吗？你做杂交的步骤是和Clontech的说明一样吗？听说抗生素AbA的浓度不好控制，你是怎样做的？
谢谢
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7楼2015-09-24 10:14:34
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qjf117

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by chong889988 at 2012-12-22 09:08:43
两个小时应该没问题，存放的时候在-20度就ok，还有配置没问题的话， 你可以PCR验证下你的诱饵基因是否还在酵母菌中AH109中的BD载体上。文库酵母菌是否存在cDNA判断，如果上述几步没问题，我想应该是这两个蛋白真的 ...

若四缺板上，能长 白色菌落，是不是说明互作比较弱而已？ 不是说强的互作可以激活4个报告基因，而显色只是其中一个吗？
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8楼2018-12-26 13:47:46
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匿名

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9楼2018-12-28 17:26:12
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