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zhuifeng7000至尊木虫 (著名写手)
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求助：用BacterioMatch®II Two-Hybrid System对两个蛋白进行细菌双杂交 已有2人参与
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1、如题，不知有谁用过这个系统进行细菌双杂交的实验？ 2、XL1-Blue MRF´ Kan这个菌有三株，其实当验证两个特定的蛋白是否有相互作用时，是否用其中的任意一株都可以的？ 3、如果两个蛋白确实是有相互作用的，在板上应该菌体应该长成什么样子？做到最后一步涂板后我的阳性对照、阴性对照还有目的菌长的都很小，菌体是否会长的比较大一点？是否会像DH5a或者Top10过夜在板上生长的样子？ 谢谢！ |
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zhuifeng7000: 金币+5, ★有帮助, 感谢交流~ 2012-11-01 23:09:23
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-11-02 13:35:12
zhuifeng7000: 金币+5, ★有帮助, 感谢交流~ 2012-11-01 23:09:23
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-11-02 13:35:12
| 我之前也是做细菌双杂交的，XL1-Blue MRF´ Kan这个菌只是用于前期载体构建使用的，不可用于来两种蛋白相互作用的筛选，进行该步骤使用的是reporter competent cell。如果两种蛋白相互作用的话，在3-AT平板上可以长出一些单菌落，使用引物pBT F/R and pTRG F/R扩增时，是可以扩增出相应条带的。培养时间是需要很长（40h），不过结果还是可行的。不过它的菌落形态与DH5a不同。 |
2楼2012-11-01 11:35:14
zhuifeng7000
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zhuifeng7000: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-30 08:57:44
zhuifeng7000: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-30 08:57:44
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以下是两种菌的遗传背景，我认为还是不同的。我有尝试用两种菌同时实验，用XL1-Blue MRF‘ Kan菌株进行转化，连阴性control都可以长。 Validation Reporter Cells ： Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 hisB supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F′ laqIq HIS3 aadA Kanr] XL1-Blue MRF′ Kan ： Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F′ proAB lacIqZΔM15 Tn5 (Kanr)]. |
9楼2013-12-27 17:01:09
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