| 查看: 2191 | 回复: 15 | |||
zhuifeng7000至尊木虫 (著名写手)
|
[求助]
求助：用BacterioMatch®II Two-Hybrid System对两个蛋白进行细菌双杂交 已有2人参与
|
|
1、如题，不知有谁用过这个系统进行细菌双杂交的实验？ 2、XL1-Blue MRF´ Kan这个菌有三株，其实当验证两个特定的蛋白是否有相互作用时，是否用其中的任意一株都可以的？ 3、如果两个蛋白确实是有相互作用的，在板上应该菌体应该长成什么样子？做到最后一步涂板后我的阳性对照、阴性对照还有目的菌长的都很小，菌体是否会长的比较大一点？是否会像DH5a或者Top10过夜在板上生长的样子？ 谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有300人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
11ychen
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 117.1
- 散金: 255
- 帖子: 96
- 在线: 45小时
- 虫号: 1432831
- 注册: 2011-10-09
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhuifeng7000: 金币+5, ★有帮助, 感谢交流~ 2012-11-01 23:09:23
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-11-02 13:35:12
zhuifeng7000: 金币+5, ★有帮助, 感谢交流~ 2012-11-01 23:09:23
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-11-02 13:35:12
| 我之前也是做细菌双杂交的，XL1-Blue MRF´ Kan这个菌只是用于前期载体构建使用的，不可用于来两种蛋白相互作用的筛选，进行该步骤使用的是reporter competent cell。如果两种蛋白相互作用的话，在3-AT平板上可以长出一些单菌落，使用引物pBT F/R and pTRG F/R扩增时，是可以扩增出相应条带的。培养时间是需要很长（40h），不过结果还是可行的。不过它的菌落形态与DH5a不同。 |
2楼2012-11-01 11:35:14
zhuifeng7000
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 16898.1
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 2048
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 598143
- 注册: 2008-09-10
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2012-11-01 23:08:59
11ychen
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 117.1
- 散金: 255
- 帖子: 96
- 在线: 45小时
- 虫号: 1432831
- 注册: 2011-10-09
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2012-11-03 19:45:14
xiaodi1010
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 34
- 帖子: 13
- 在线: 33.8小时
- 虫号: 1214214
- 注册: 2011-02-26
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2013-06-05 19:33:11
zhuifeng7000
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 16898.1
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 2048
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 598143
- 注册: 2008-09-10
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2013-06-06 09:21:16
7楼2013-09-29 22:30:08
zhuifeng7000
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 16898.1
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 2048
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 598143
- 注册: 2008-09-10
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2013-09-30 08:47:15
xiaodi1010
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 34
- 帖子: 13
- 在线: 33.8小时
- 虫号: 1214214
- 注册: 2011-02-26
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
zhuifeng7000: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-30 08:57:44
zhuifeng7000: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-30 08:57:44
|
以下是两种菌的遗传背景，我认为还是不同的。我有尝试用两种菌同时实验，用XL1-Blue MRF‘ Kan菌株进行转化，连阴性control都可以长。 Validation Reporter Cells ： Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 hisB supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F′ laqIq HIS3 aadA Kanr] XL1-Blue MRF′ Kan ： Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F′ proAB lacIqZΔM15 Tn5 (Kanr)]. |
9楼2013-12-27 17:01:09
zhuifeng7000
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 16898.1
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 2048
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 598143
- 注册: 2008-09-10
- 专业: 微生物生理与生物化学
10楼2013-12-30 08:57:34
投票:
