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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：用BacterioMatch®II Two-Hybrid System对两个蛋白进行细菌双杂交
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 求助：用BacterioMatch®II Two-Hybrid System对两个蛋白进行细菌双杂交 已有2人参与

1、如题，不知有谁用过这个系统进行细菌双杂交的实验？
2、XL1-Blue MRF´ Kan这个菌有三株，其实当验证两个特定的蛋白是否有相互作用时，是否用其中的任意一株都可以的？
3、如果两个蛋白确实是有相互作用的，在板上应该菌体应该长成什么样子？做到最后一步涂板后我的阳性对照、阴性对照还有目的菌长的都很小，菌体是否会长的比较大一点？是否会像DH5a或者Top10过夜在板上生长的样子？
谢谢！
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1楼 2012-09-28 10:29:27
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xiaodi1010

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhuifeng7000: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-30 08:57:44
以下是两种菌的遗传背景，我认为还是不同的。我有尝试用两种菌同时实验，用XL1-Blue MRF‘ Kan菌株进行转化，连阴性control都可以长。
Validation Reporter Cells ：
Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173
endA1 hisB supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F′ laqIq HIS3 aadA Kanr]

XL1-Blue MRF′ Kan  ：  
Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F′ proAB lacIqZΔM15 Tn5 (Kanr)].
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9楼2013-12-27 17:01:09
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11ychen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhuifeng7000: 金币+5, ★有帮助, 感谢交流~ 2012-11-01 23:09:23
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-11-02 13:35:12
我之前也是做细菌双杂交的，XL1-Blue MRF´ Kan这个菌只是用于前期载体构建使用的，不可用于来两种蛋白相互作用的筛选，进行该步骤使用的是reporter competent cell。如果两种蛋白相互作用的话，在3-AT平板上可以长出一些单菌落，使用引物pBT F/R and pTRG F/R扩增时，是可以扩增出相应条带的。培养时间是需要很长（40h），不过结果还是可行的。不过它的菌落形态与DH5a不同。
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2楼2012-11-01 11:35:14
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 11ychen at 2012-11-01 11:35:14
我之前也是做细菌双杂交的，XL1-Blue MRF´ Kan这个菌只是用于前期载体构建使用的，不可用于来两种蛋白相互作用的筛选，进行该步骤使用的是reporter competent cell。如果两种蛋白相互作用的话，在3-AT平板 ...

我开始也有这个怀疑，但是我看了公司的protocol后发现其实XL1-Blue MRF这个菌的基因型和reporter competent cell是一模一样的，只不多不同的菌转化效率不同，其他的似乎没什么区别，从原理上来说的话只要激活报告系统就可以生长，XL1-Blue MRF也是含有报告系统的，所以我觉得用这个菌做后面的验证应该也没有问题吧？
非常感谢交流~
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3楼2012-11-01 23:08:59
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11ychen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhuifeng7000 at 2012-11-01 23:08:59
我开始也有这个怀疑，但是我看了公司的protocol后发现其实XL1-Blue MRF这个菌的基因型和reporter competent cell是一模一样的，只不多不同的菌转化效率不同，其他的似乎没什么区别，从原理上来说的话只要激活报告系 ...

这个我个人觉得还是有问题的，不知道你有没有尝试对XL1-Blue MRF进行共转化，我有试过，不知道是自己试验出问题了，还是本来就不可用于双杂家？当用引物扩增时，只有一种对应的蛋白条带出现？所以还是建议使用reporter cell。能否分享一下这些菌的基因型。谢谢！
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4楼2012-11-03 19:45:14
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