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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

[求助] 酵母双杂-转完质粒的酵母在一缺液体培养基上不长???已有1人参与

各位虫友好:
       最近在用泛素化酵母双杂系统筛选互作蛋白,用的菌株是NMY32,当把Bait载体转进去后,在SD-LEU的板子(PH=5.8)上长出克隆,两三天后能到2-3mm,但挑克隆划线后转到液体的培养基上(自然PH值),30度,200rpm,摇了快两天了,OD600到了0.3左右就再也不增加了,连续挑了好几个克隆都是如此,不知道有没有虫友用过这套体系,是否也碰到过类似的问题?请多多指教
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jiayoubashaonian
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13345129835

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lingling0629 at 2014-10-15 15:06:03
各位好,我也遇到了这样的情况,我转了目的基因后,在SD-Ura质粒筛选培养基上长得还行,挑了克隆做菌液PCR,还送去测序了,用测序正确的酵母转化子用YPDA划线后,挑单克隆后用液体SD-Ura摇菌,转化空载的可以长出来 ...

不知道您的问题解决了没
8楼2015-12-02 09:02:25
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