24小时热门版块排行榜    

查看: 6015  |  回复: 11

1990xuxiao

银虫 (正式写手)

[求助] 关于酵母同源重组的问题

我想问一下,在酵母同源重组时,选择用>10ug量的含同源臂的PCR片段电转和选择用含同源臂目的片段的线性化质粒电转酵母,同源重组效率更高更好,为什么呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励回帖交流! 2014-07-23 12:54:29
gyesang: 回帖置顶 2014-07-23 12:54:41
直接扩增出来的片段只要含有大小合适的同源臂和筛选标记作用和载体是一样的。但是PCR产物必须得纯化,除去引物二聚体和杂带,而且还得测序保证序列的准确度,纯化后如果你还能得到>10ug的产物那自然没有问题。载体的好处是你不需要考虑同源臂大小和内部的必要元件,直接把你的基因和载体连上再转化就可以了
大家相互帮助哈
8楼2014-07-22 22:53:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

1990xuxiao(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-07-22 20:25:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1990xuxiao(金币+1): 谢谢参与
3楼2014-07-22 20:28:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1990xuxiao(金币+1): 谢谢参与
4楼2014-07-22 20:31:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1990xuxiao(金币+1): 谢谢参与
祝福
5楼2014-07-22 20:31:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1990xuxiao(金币+1): 谢谢参与
6楼2014-07-22 20:32:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
7楼2014-07-22 20:33:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

作化学转化就OK啦,效率更高,15bp以上的同源序列就能做

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2014-07-24 21:39:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1990xuxiao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-22 22:53:10
直接扩增出来的片段只要含有大小合适的同源臂和筛选标记作用和载体是一样的。但是PCR产物必须得纯化,除去引物二聚体和杂带,而且还得测序保证序列的准确度,纯化后如果你还能得到>10ug的产物那自然没有问题。载 ...

恩,我现在就是用载体线性化后再电转的,希望能有效果
10楼2014-07-26 10:02:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1990xuxiao 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 8/400 2026-08-02 18:24 by ca3DVAx4OB19
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 12/600 2026-08-02 18:14 by ca3DVAx4OB19
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 14/700 2026-08-02 18:11 by ca3DVAx4OB19
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 20/1000 2026-08-02 18:04 by ca3DVAx4OB19
[博后之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 20/1000 2026-08-02 18:04 by ca3DVAx4OB19
[基金申请] 准备明年的基金了 +7 Tide man 2026-07-27 7/350 2026-08-02 16:43 by gltch
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 9/450 2026-08-02 16:32 by jHcrHMhbKCFV
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 15/750 2026-08-02 16:23 by jHcrHMhbKCFV
[基金申请] 面上再次挂了,太难了,躺也躺不了,倦也卷不过,小学校之殇! +18 低垂的野花 2026-07-31 24/1200 2026-08-02 16:03 by swallowwh
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +9 archvillain 2026-08-02 11/550 2026-08-02 15:44 by alexon
[找工作] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 12/600 2026-08-02 13:43 by jHcrHMhbKCFV
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 16/800 2026-08-02 13:34 by jHcrHMhbKCFV
[教师之家] 基础研究怎么拉横向,学校到款任务越来越多,难以完成 拉横向,都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 10/500 2026-08-02 10:00 by 锦衣卫寒战
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备? 50+3 kf2781974 2026-07-31 7/350 2026-08-02 07:59 by 88817753
[基金申请] 微信指数没变化,科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 18/900 2026-07-31 18:35 by lzchaihuo
[基金申请] 系统今天又提示维护了,估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 同事接到电话了,我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
信息提示
请填处理意见