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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 同源重组敲除13KB大片段
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syn1985

木虫 (正式写手)

[求助] 同源重组敲除13KB大片段

链霉菌同源重组要敲除13KB的大片段 2个同源臂距离13KB会不会造成2次同源臂同源重组低呢？
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1楼 2012-04-06 22:17:19
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
syn1985: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-04-12 10:11:01
zhang8826857: 金币+2, MicEPI+1, good 2012-04-17 12:38:15
有可能。所以链霉菌用I-sceI技术，就是在拿到单交换后，导入一个I-sceI酶，它可以识别单交换上去的质粒骨架上的一个位点，从这里切开染色体，增加二次同源交换的几率。相关细节查文献，关键字就是I-sceI及链霉菌，应该可以查到。这个技术链霉菌里用的已经比较多了。
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2楼2012-04-06 22:27:39
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syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-04-06 22:27:39:
有可能。所以链霉菌用I-sceI技术，就是在拿到单交换后，导入一个I-sceI酶，它可以识别单交换上去的质粒骨架上的一个位点，从这里切开染色体，增加二次同源交换的几率。相关细节查文献，关键字就是I-sceI及链霉菌， ...

不知道含有这个酶的质粒哪里有卖的？
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3楼2012-04-12 10:10:52
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gywyl1977

木虫 (正式写手)
建议根据发表的文章查一下国内做链霉菌的课题组，可以去信索取。
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4楼2012-04-12 10:53:25
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
13kb应该没问题。同源重组主要看同源臂的长度，和被敲除基因长度没直接关系，在真菌里见过文献敲除100kb以上。
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5楼2012-04-17 01:13:08
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syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-04-17 01:13:08:
13kb应该没问题。同源重组主要看同源臂的长度，和被敲除基因长度没直接关系，在真菌里见过文献敲除100kb以上。

那我敲13KB 同源臂1400bp 小不小呢
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6楼2012-04-17 09:07:25
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by syn1985 at 2012-04-17 02:07:25:
那我敲13KB 同源臂1400bp 小不小呢

左右臂都1.4Kb,可以尝试...最好2kb以上吧
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7楼2012-04-17 18:53:31
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pandajay

木虫 (小有名气)
现在链霉菌大片段敲除可以尝试用pcr-targeting 把这个系统建立好后 敲除大片段基因挺快速的
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8楼2012-04-20 10:29:46
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syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by pandajay at 2012-04-20 10:29:46:
现在链霉菌大片段敲除可以尝试用pcr-targeting 把这个系统建立好后 敲除大片段基因挺快速的

前期文库不是用cos质粒建的文库 所以没办法用这个方法
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9楼2012-04-20 10:59:57
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