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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细菌同源重组进行基因敲除的同源臂最小需要多少
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haylig

铜虫 (小有名气)

[交流] 细菌同源重组进行基因敲除的同源臂最小需要多少 已有8人参与

革兰氏阴性 细菌在利用同源重组技术进行基因敲除时，构建的敲除载体上需要敲除的基因两端同源臂最少需要多少才能和目的菌进行同源重组，请有经验的介绍一下，谢谢。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-1 at 20:36 ]
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1楼 2009-09-01 19:29:52
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

30937747

木虫 (小有名气)
★
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难道大家用的都是Red/ET同源重组？两端各带50bp就可以啦，设计在引物里，我一直都是这样做的。
或者采用常规的，一般是两端各1000bp
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我依旧会努力.
8楼2012-08-03 20:33:48
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普通回帖

snow889

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
800-1000bp的效率比较高
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2楼2009-09-02 02:15:15
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haylig

铜虫 (小有名气)
啊，这么多，我的目的基因才1100bp，就是从正中间切开连接也才500多，这样的有什么办法吗？
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3楼2009-09-08 15:33:30
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xmuwangym

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by haylig at 2009-09-01 19:29:52:
革兰氏阴性 细菌在利用同源重组技术进行基因敲除时，构建的敲除载体上需要敲除的基因两端同源臂最少需要多少才能和目的菌进行同源重组，请有经验的介绍一下，谢谢。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-1  ...

革阴的同源臂要求不需要那么长，这取决于你构建线性DNA的方式了。文献说35-50bp就够了。这种方法是直接把你的同源区段加到引物的5端，然后采用长引物PCR得到的。当然向上面的帖子中说的同源臂适当加长，是能够提高重组的效率的。
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厚德载物
4楼2010-04-26 19:04:28
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rosalie161

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以使用那个融合PCR，最好长一点。
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Rosalei.....
5楼2010-04-26 21:24:46
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望月台

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xmuwangym at 2010-04-26 19:04:28:

革阴的同源臂要求不需要那么长，这取决于你构建线性DNA的方式了。文献说35-50bp就够了。这种方法是直接把你的同源区段加到引物的5端，然后采用长引物PCR得到的。当然向上面的帖子中说的同源臂适当加长，是能够提 ...

另外还需要helper plasmid 编码的重组酶。36-50bp足够了
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6楼2010-04-28 16:33:44
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flownaway

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
需要几十bp的是lambda Red重组系统，要是自杀质粒的话需要很长
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7楼2012-06-06 17:20:59
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雨欣crystal

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-09-14 17:56:49
最少54bp但是同源臂越长越容易重组成功，我之前就同时做了一个54bp的和一个500bp的，后面的这个重组率要高很多……
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9楼2012-09-14 14:11:35
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biobiobio

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
clonexpress的说明书上说15bp就可以反应了，当然你设置几十bp也可以,效果会更好，但，引物设计要加钱，你懂的
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10楼2012-11-26 21:34:10
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