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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于酵母同源重组的问题
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1990xuxiao

银虫 (正式写手)

[求助] 关于酵母同源重组的问题

我想问一下，在酵母同源重组时，选择用>10ug量的含同源臂的PCR片段电转和选择用含同源臂目的片段的线性化质粒电转酵母，同源重组效率更高更好，为什么呢
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1楼2014-07-22 20:24:45
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励回帖交流！ 2014-07-23 12:54:29
gyesang: 回帖置顶 2014-07-23 12:54:41
直接扩增出来的片段只要含有大小合适的同源臂和筛选标记作用和载体是一样的。但是PCR产物必须得纯化，除去引物二聚体和杂带，而且还得测序保证序列的准确度，纯化后如果你还能得到>10ug的产物那自然没有问题。载体的好处是你不需要考虑同源臂大小和内部的必要元件，直接把你的基因和载体连上再转化就可以了
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大家相互帮助哈
8楼2014-07-22 22:53:10
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pzx1004
★
1990xuxiao(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-07-22 20:25:06
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Neo2000

木虫 (著名写手)
作化学转化就OK啦，效率更高，15bp以上的同源序列就能做

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2014-07-24 21:39:24
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1990xuxiao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-22 22:53:10
直接扩增出来的片段只要含有大小合适的同源臂和筛选标记作用和载体是一样的。但是PCR产物必须得纯化，除去引物二聚体和杂带，而且还得测序保证序列的准确度，纯化后如果你还能得到>10ug的产物那自然没有问题。载 ...

恩，我现在就是用载体线性化后再电转的，希望能有效果
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10楼2014-07-26 10:02:12
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