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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酵母基因敲除，同源臂长度的问题
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三蛰

铜虫 (小有名气)

[求助] 酵母基因敲除，同源臂长度的问题已有6人参与

我做基因敲除，不太成功，现在考虑是不是我的disruption cassette 的两段的同源臂太短？38bp。必须要大于45bp？我看不少文献都是45bp。。。

[ Last edited by silicare on 2014-2-17 at 11:57 ]
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我不会！
1楼2014-01-08 11:28:56
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15879003030

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-08 19:09:41
三蛰: 金币+2, ★有帮助 2014-01-12 21:45:31
我们通常用两三百
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2楼2014-01-08 12:36:59
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三蛰

铜虫 (小有名气)
内容已删除
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我不会！
3楼2014-01-08 22:37:48
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spirit87

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-01-10 23:22:56
三蛰: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-01-12 21:45:21
酵母一般情况200以上，我们用500左右一直没有问题，某些种200bp效率会低很多
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4楼2014-01-10 20:01:28
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三蛰

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by spirit87 at 2014-01-10 20:01:28
酵母一般情况200以上，我们用500左右一直没有问题，某些种200bp效率会低很多

谢谢，我也想长度长点，只是看了不少文献，都是45bp，看来我得增长一点。还有，您能发给我您敲除所依据的文献吗？论文时好引用，谢谢！追加金币嘿嘿
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我不会！
5楼2014-01-12 21:45:08
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beer胖

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般都500多bp的同源臂，好重组
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6楼2014-02-17 10:03:09
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雪人25

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-18 11:50:47
貌似你用的确实太短了，酵母基因敲除一般用300-400 bp的比较合适吧
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7楼2014-02-17 15:38:26
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

500-800bp是最佳的片段，希望你考虑一下，没有见这么短的。
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8楼2014-02-18 14:32:37
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小猪和哼哼

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
三蛰: 金币+6, ★有帮助, 2 2014-09-04 11:13:14
个人半年多的经验，肯定同源臂长点好，但是也别太长，500bp左右我感觉效率可以，好运。
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9楼2014-09-03 20:16:47
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chrqrq09

铁虫 (初入文坛)
你用的是酿酒酵母S.cerevisiae吗？这个酵母一般50bp的同源臂就可以，但对于其它的酵母如Yarrowia lipolytica,同源臂1000bp，其定点同源重组的效率还非常的低啊，我做过的1000bp的同源臂，1%的正确同源重组还达不到。
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你好
10楼2015-05-11 22:33:59
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