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zhuabachon

金虫 (小有名气)


[求助] 原核基因敲除抗性基因的问题

问下,我要用同源重组的方法来敲除枯草芽孢杆菌基因组中的B基因,请问用于筛选的抗性基因的Km的前面要不要带上启动子,后面要不要带上终止子,B基因前有A基因,后有C基因,原核是不只要A前面有一个启动子,B后面只要有一个终止子就可以了的?然后ABC上的核心元件成窜,中间有适当的间隔序列隔开??
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-04 20:56:46
Km要带启动子和终止子,最好是扩成3的倍数个碱基。
ABC可以成串,换成Km后也会成串的
小木虫之有关部门负责人
2楼2012-05-04 17:49:59
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zhuabachon

金虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by scelab at 2012-05-04 17:49:59:
Km要带启动子和终止子,最好是扩成3的倍数个碱基。
ABC可以成串,换成Km后也会成串的

谢谢您的回复,我还有些不是很明白,原核中基因组中A,B,C是不都有各自的启动子和终止子的,还是通用一套启动子和终止子?如果我的同源臂左臂带上要敲除的B基因编码框的前100个bp,翻译的时候会不会以B基因的ATG为起始,合成一个含33个氨基酸的B蛋白的序列,和一个移码的KM基因的融合蛋白,结果即使替换成功了,还是没有KM抗性呢?
3楼2012-05-04 18:01:25
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

【答案】应助回帖


zhuabachon: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-04 22:05:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhuabachon at 2012-05-04 18:01:25:
谢谢您的回复,我还有些不是很明白,原核中基因组中A,B,C是不都有各自的启动子和终止子的,还是通用一套启动子和终止子?如果我的同源臂左臂带上要敲除的B基因编码框的前100个bp,翻译的时候会不会以B基因的ATG ...

你理解有误
每个基因都有起始和终止code,和转录组不一样,你看看乳糖操纵子, mRNA合成的时候是一起的,但是每个基因还是单独表达的,不存在你的疑虑
小木虫之有关部门负责人
4楼2012-05-04 19:08:41
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zhuabachon

金虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by scelab at 2012-05-04 19:08:41:
你理解有误
每个基因都有起始和终止code,和转录组不一样,你看看乳糖操纵子, mRNA合成的时候是一起的,但是每个基因还是单独表达的,不存在你的疑虑

恩,谢谢,我弄清楚了,确实要加的
5楼2012-05-04 22:01:03
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