24小时热门版块排行榜

返回列表

srlee

铁杆木虫 (小有名气)

MolEPI: 7
应助: 11 (小学生)
金币: 4480.7
帖子: 222
在线: 511.1小时
虫号: 802845

[交流] 【求助/交流】请教基因敲除问题

最近准备利用同源重组做链霉菌的基因阻断，有两个问题向有经验的高手请教：

1）在利用PCR-targeting做基因阻断时，用一个抗性基因置换要敲除的目的片段，置换进去的这个抗性基因在链霉菌中会不会对链霉菌本身其他基因的表达有影响？

2）在构建敲除的质粒时，通过PCR得到左右两个同源臂，利用引物设计时两端酶切位点连接在一起，这样在同源重组时会把两个同源臂之间的酶切位点给引入链霉菌中，这个引入的酶切位点会不会对链霉菌本身其他基因的表达有影响？在In frame deletion 阻断时，左右同源臂基因多长时重组效率比较高呢？

[ Last edited by srlee on 2010-12-19 at 10:48 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用已经有0人回复
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展已经有1人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有235人回复
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展已经有0人回复
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘已经有1人回复
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展已经有0人回复
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选已经有0人回复
MCC950：NLRP3炎症小体特异性抑制剂的科研应用与前景已经有0人回复
康替唑胺研发17年：如何解决多重耐药菌感染难题已经有0人回复
伊曲莫德（Etrasimod）从“肠道免疫失控”到精准靶向干预已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2010-12-19 10:43:44

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
srlee(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2):good 2010-12-19 13:34:55

1，看你阻断的是什么基因了，如果阻断了一个必需的代谢途径导致代谢流不通，被阻断的代谢流之后的基因肯定会被影响。
2，如果不存在1中的问题，2中的问题就是杞人忧天了。

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2010-12-19 12:38:47

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

srlee

铁杆木虫 (小有名气)

MolEPI: 7
应助: 11 (小学生)
金币: 4480.7
帖子: 222
在线: 511.1小时
虫号: 802845

引用回帖:

Originally posted by susizheng at 2010-12-19 12:38:47:
1，看你阻断的是什么基因了，如果阻断了一个必需的代谢途径导致代谢流不通，被阻断的代谢流之后的基因肯定会被影响。
2，如果不存在1中的问题，2中的问题就是杞人忧天了。

在链霉菌中大部分次生代谢基因是成簇排列的，只阻断某个代谢途径中的一个基因，那么这个代谢途径受到影响或者说这个代谢途径所要表达化合物就有可能不在产生了，这个是一定的！我想知道的是，经过同源重组从外源添加一段基因（如抗性基因）到链霉菌基因组上后，会不会对其他的成簇次生代谢基因表达产生影响或者产生表达压力呢？

[ Last edited by srlee on 2010-12-19 at 13:58 ]

赞一下

回复此楼

3楼2010-12-19 13:56:14

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

引用回帖:

Originally posted by srlee at 2010-12-19 13:56:14:

在链霉菌中大部分次生代谢基因是成簇排列的，只阻断某个代谢途径中的一个基因，那么这个代谢途径受到影响或者说这个代谢途径所要表达化合物就有可能不在产生了，这个是一定的！我想知道的是，经过同源重组从外 ...

应该不会的。

回复此楼

4楼2010-12-19 18:02:55

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖