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【求助/交流】请教基因敲除问题
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最近准备利用同源重组做链霉菌的基因阻断,有两个问题向有经验的高手请教: 1)在利用PCR-targeting做基因阻断时,用一个抗性基因置换要敲除的目的片段,置换进去的这个抗性基因在链霉菌中会不会对链霉菌本身其他基因的表达有影响? 2)在构建敲除的质粒时,通过PCR得到左右两个同源臂,利用引物设计时两端酶切位点连接在一起,这样在同源重组时会把两个同源臂之间的酶切位点给引入链霉菌中,这个引入的酶切位点会不会对链霉菌本身其他基因的表达有影响?在In frame deletion 阻断时,左右同源臂基因多长时重组效率比较高呢? [ Last edited by srlee on 2010-12-19 at 10:48 ] |
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