24小时热门版块排行榜    

查看: 2358  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

srlee

铁杆木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】请教基因敲除问题

最近准备利用同源重组做链霉菌的基因阻断,有两个问题向有经验的高手请教:

1)在利用PCR-targeting做基因阻断时,用一个抗性基因置换要敲除的目的片段,置换进去的这个抗性基因在链霉菌中会不会对链霉菌本身其他基因的表达有影响?

2)在构建敲除的质粒时,通过PCR得到左右两个同源臂,利用引物设计时两端酶切位点连接在一起,这样在同源重组时会把两个同源臂之间的酶切位点给引入链霉菌中,这个引入的酶切位点会不会对链霉菌本身其他基因的表达有影响?在In frame deletion 阻断时,左右同源臂基因多长时重组效率比较高呢?

[ Last edited by srlee on 2010-12-19 at 10:48 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
引用回帖:
Originally posted by srlee at 2010-12-19 13:56:14:


在链霉菌中大部分次生代谢基因是成簇排列的,只阻断某个代谢途径中的一个基因,那么这个代谢途径受到影响或者说这个代谢途径所要表达化合物就有可能不在产生了,这个是一定的!我想知道的是,经过同源重组从外 ...

应该不会的。
4楼2010-12-19 18:02:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
★ ★ ★
srlee(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2):good 2010-12-19 13:34:55
1,看你阻断的是什么基因了,如果阻断了一个必需的代谢途径导致代谢流不通,被阻断的代谢流之后的基因肯定会被影响。
2,如果不存在1中的问题,2中的问题就是杞人忧天了。
2楼2010-12-19 12:38:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

srlee

铁杆木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-19 12:38:47:
1,看你阻断的是什么基因了,如果阻断了一个必需的代谢途径导致代谢流不通,被阻断的代谢流之后的基因肯定会被影响。
2,如果不存在1中的问题,2中的问题就是杞人忧天了。

在链霉菌中大部分次生代谢基因是成簇排列的,只阻断某个代谢途径中的一个基因,那么这个代谢途径受到影响或者说这个代谢途径所要表达化合物就有可能不在产生了,这个是一定的!我想知道的是,经过同源重组从外源添加一段基因(如抗性基因)到链霉菌基因组上后,会不会对其他的成簇次生代谢基因表达产生影响或者产生表达压力呢?

[ Last edited by srlee on 2010-12-19 at 13:58 ]
3楼2010-12-19 13:56:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★
srlee(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~~ 2010-12-20 00:11:19
1:个人认为一般情况下不会受什么影响了,但是如果是好几个基因属于同一个操纵子,不排除polar effect的可能性!

2:不会影响!
5楼2010-12-19 20:08:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 8/400 2026-09-01 12:58 by ssyjh
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
请填处理意见