24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (4131)
>虫友互识 (256)
>文献求助 (162)
>招聘信息布告栏 (109)
>论文投稿 (87)
>导师招生 (74)
>考博 (59)
>休闲灌水 (54)
>学术会议 (50)
>教师之家 (36)
>博后之家 (35)
>找工作 (33)
>硕博家园 (32)
>基金申请 (30)
>公派出国 (30)
>考研 (30)

返回列表

srlee

铁杆木虫 (小有名气)

MolEPI: 7
应助: 11 (小学生)
金币: 4480.7
帖子: 222
在线: 511.1小时
虫号: 802845

[交流] 【求助/交流】请教基因敲除问题

最近准备利用同源重组做链霉菌的基因阻断，有两个问题向有经验的高手请教：

1）在利用PCR-targeting做基因阻断时，用一个抗性基因置换要敲除的目的片段，置换进去的这个抗性基因在链霉菌中会不会对链霉菌本身其他基因的表达有影响？

2）在构建敲除的质粒时，通过PCR得到左右两个同源臂，利用引物设计时两端酶切位点连接在一起，这样在同源重组时会把两个同源臂之间的酶切位点给引入链霉菌中，这个引入的酶切位点会不会对链霉菌本身其他基因的表达有影响？在In frame deletion 阻断时，左右同源臂基因多长时重组效率比较高呢？

[ Last edited by srlee on 2010-12-19 at 10:48 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有79人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性已经有0人回复
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点已经有0人回复
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记已经有0人回复
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点已经有0人回复
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用已经有0人回复
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2010-12-19 10:43:44

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
srlee(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2):good 2010-12-19 13:34:55

1，看你阻断的是什么基因了，如果阻断了一个必需的代谢途径导致代谢流不通，被阻断的代谢流之后的基因肯定会被影响。
2，如果不存在1中的问题，2中的问题就是杞人忧天了。

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2010-12-19 12:38:47

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

srlee

铁杆木虫 (小有名气)

MolEPI: 7
应助: 11 (小学生)
金币: 4480.7
帖子: 222
在线: 511.1小时
虫号: 802845

引用回帖:

Originally posted by susizheng at 2010-12-19 12:38:47:
1，看你阻断的是什么基因了，如果阻断了一个必需的代谢途径导致代谢流不通，被阻断的代谢流之后的基因肯定会被影响。
2，如果不存在1中的问题，2中的问题就是杞人忧天了。

在链霉菌中大部分次生代谢基因是成簇排列的，只阻断某个代谢途径中的一个基因，那么这个代谢途径受到影响或者说这个代谢途径所要表达化合物就有可能不在产生了，这个是一定的！我想知道的是，经过同源重组从外源添加一段基因（如抗性基因）到链霉菌基因组上后，会不会对其他的成簇次生代谢基因表达产生影响或者产生表达压力呢？

[ Last edited by srlee on 2010-12-19 at 13:58 ]

赞一下

回复此楼

3楼2010-12-19 13:56:14

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

引用回帖:

Originally posted by srlee at 2010-12-19 13:56:14:

在链霉菌中大部分次生代谢基因是成簇排列的，只阻断某个代谢途径中的一个基因，那么这个代谢途径受到影响或者说这个代谢途径所要表达化合物就有可能不在产生了，这个是一定的！我想知道的是，经过同源重组从外 ...

应该不会的。

回复此楼

4楼2010-12-19 18:02:55

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖