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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酵母质粒提取
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】酵母质粒提取 已有4人参与

请教酵母做得多的虫友，那种方法提取的得率比较高的。

现在用天根的裂解酶法，除时间长外，得到的DNA还少.
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1楼 2010-06-07 17:16:56
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tancf

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):欢迎分享经验。 2010-06-07 20:08:58
我当时也是用的天根的酶法裂解，量是很小的，跑电泳有的时候也看不出来。不过我提取之后是用来做PCR，还是能扩增出来的。
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2楼2010-06-07 19:13:07
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
试试omega的。
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仕不可不弘毅，任重而道远
3楼2010-06-07 20:13:17
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
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scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-07 22:02:39
引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2010-06-07 20:13:17:
试试omega的。

我试过omega的，销售商说提取质粒后电泳可以看得见，但是我做了很多次，跑电泳都看不见（我的2u质粒，拷贝数应该不低），但是PCR验证的话还是没有问题的，做酶切验证，我只能在酵母中提取质粒后转化大肠，再提质粒。
不知道仁兄使用情况是什么样的？
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Thank-you，so-blue.
4楼2010-06-07 20:37:37
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-06-07 20:37:37:

我试过omega的，销售商说提取质粒后电泳可以看得见，但是我做了很多次，跑电泳都看不见（我的2u质粒，拷贝数应该不低），但是PCR验证的话还是没有问题的，做酶切验证，我只能在酵母中提取质粒后转化大肠，再提质 ...

和你的情况差不多。
提出来的质粒PCR很强的带，但是转化大肠杆菌的时候开始做得不好，后来把质粒浓缩了之后转基本都能得到阳性的克隆，就是数目不多。
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5楼2010-06-08 08:59:17
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