应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒的转化体积为什么不能超过感受态的十分之一
171/2返回列表12下一页
查看: 6681  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

天官赐福

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒的转化体积为什么不能超过感受态的十分之一 已有11人参与

看各个生物试剂公司的感受态说明书上讲，转化的质粒体积不能超过感受态体积的十分之一，初不明缘由，查阅一番，有云“这样是保证感受态细胞过量”。
      既然是想让质粒进入感受太细胞中，为何不是让质粒过量呢？
      小生最近在作酵母双杂交，对于加入的转化质粒的体积是否一如转化大肠杆菌那样？望各位大虾不吝赐教！！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物学技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
天之诱民，如埙如箎
1楼 2011-04-11 08:32:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+3): 鼓励 2011-04-11 12:13:20
保证细胞过量时为了保证每一个质粒都能转进去细胞里
1.质粒毕竟要珍贵一点，细胞好养又好做；
2.其实质粒浓度高点也没事，但是转化效率差不多的；
3.试剂公司处于对自己的名声负责，假如你用50ul质粒和100ul质粒同样的转化 ，都得到了100个克隆，那么你不觉得让你用50ul质粒做转化更能显示出试剂公司的试剂的NB之处嘛
4.质粒浓度太大了，容易让同一个细胞转化进多个质粒，对细胞本身是负担，回印务高死亡率的
赞一下(3人) 回复此楼
青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
3楼2011-04-11 09:14:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
窃以为，公司肯定希望你多多用感受态，用完了再买，哈哈哈~

回天使君：早上偶木有登场捏，您帖子里我改成jhu132llh了。
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2011-04-11 14:05:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-11 12:13:10
不用十分之一也可。一般公司买的感受态100ul每管，使用时加入10ul连接质粒。

为了节省，我们经常用50ul，同样加入10ul质粒。效果没有可见的区别。
赞一下(2人) 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2011-04-11 08:57:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天官赐福

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-04-11 09:14:05:
保证细胞过量时为了保证每一个质粒都能转进去细胞里
1.质粒毕竟要珍贵一点，细胞好养又好做；
2.其实质粒浓度高点也没事，但是转化效率差不多的；
3.试剂公司处于对自己的名声负责，假如你用50ul质粒和100ul质 ...

明白了，非常感谢！！！
回复此楼
天之诱民，如埙如箎
4楼2011-04-11 10:30:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-11 12:13:32
1、最怕的是多个质粒进入同一个菌，这样就不是“单克隆”了
2、连接buffer中的盐成分可能会影响转化效率

至于其他的因素应该不用考虑太多
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-04-11 10:31:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(EPI+1): 2011-04-11 12:12:34
西瓜:编辑内容 2011-04-11 14:01
看了楼上几位的，其实个人认为这个转化是看具体情况
1:一般感受态细胞呢，比如10b神马的自己做，转化的时候要看转什么东西进去了，转质粒（含重组的）少量，即2ul入50，60,70ul的感受态细胞均可以，如果是连接产物呢？可以多转化一些。。。5ul 6ul都行。
2：其实合适的比例对于转化效率的高低至关重要，还有就是电转化仪的电压，转化管都是有一定关系的。。
3：回复jhu132llh ：质粒其实要看什么质粒的，不过我觉得不太珍贵吧？几微升转化进大肠杆菌，提质粒可以提取很多的。。。。
4：回复ATP：有试过将多个质粒转化进一个感受态吗？怎么进行验证各种质粒是否已经成功转入呢？如果载体上带有抗性呢？怎么验证？

[ Last edited by 西瓜 on 2011-4-11 at 14:01 ]
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-04-11 11:39:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖仅楼主可见
赞一下
7楼2011-04-11 12:25:42
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3): good 2011-04-11 12:41:29
引用回帖:
Originally posted by 天官赐福 at 2011-04-11 08:32:17:
看各个生物试剂公司的感受态说明书上讲，转化的质粒体积不能超过感受态体积的十分之一，初不明缘由，查阅一番，有云“这样是保证感受态细胞过量”。
      既然是想让质粒进入感受太细胞中，为何不是让质粒过量呢 ...

关于质粒的转化体积原因有：
（1）如果加入质粒体积太大的话会影响感受态的的缓冲液的缓冲能力，从而影响感受态的转化效率
（2）我们知道经处理后的感受态细胞膜上产生了很多孔洞，当热激时吸附在细胞壁上的DNA会从孔洞进入细胞内，当质粒浓度太大后会阻塞孔洞，导致转化效率降低
赞一下(2人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2011-04-11 12:37:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-04-11 14:02:46
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-11 11:39:09:
看了楼上几位的，其实个人认为这个转化是看具体情况
1:一般感受态细胞呢，比如10b神马的自己做，转化的时候要看转什么东西进去了，转质粒（含重组的）少量，即2ul入50，60,70ul的感受态细胞均可以，如果是连接产 ...

本科的课堂听说过~~自己因为不经常做克隆所以不知道~~可以做实验试试的
用两种抗性的质粒混在一起，高浓度转化涂到抗生素A的板，再挑克隆涂到抗生素B的板。不知道这个概率会有多高。
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2011-04-11 13:17:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 天官赐福 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +14 yaoyewhu2008 2026-08-20 14/700 2026-08-20 09:19 by littlezl
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭