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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒的转化体积为什么不能超过感受态的十分之一
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天官赐福

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒的转化体积为什么不能超过感受态的十分之一 已有11人参与

看各个生物试剂公司的感受态说明书上讲，转化的质粒体积不能超过感受态体积的十分之一，初不明缘由，查阅一番，有云“这样是保证感受态细胞过量”。
      既然是想让质粒进入感受太细胞中，为何不是让质粒过量呢？
      小生最近在作酵母双杂交，对于加入的转化质粒的体积是否一如转化大肠杆菌那样？望各位大虾不吝赐教！！！
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天之诱民，如埙如箎
1楼 2011-04-11 08:32:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+3): 鼓励 2011-04-11 12:13:20
保证细胞过量时为了保证每一个质粒都能转进去细胞里
1.质粒毕竟要珍贵一点，细胞好养又好做；
2.其实质粒浓度高点也没事，但是转化效率差不多的；
3.试剂公司处于对自己的名声负责，假如你用50ul质粒和100ul质粒同样的转化 ，都得到了100个克隆，那么你不觉得让你用50ul质粒做转化更能显示出试剂公司的试剂的NB之处嘛
4.质粒浓度太大了，容易让同一个细胞转化进多个质粒，对细胞本身是负担，回印务高死亡率的
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
3楼2011-04-11 09:14:05
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
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窃以为，公司肯定希望你多多用感受态，用完了再买，哈哈哈~

回天使君：早上偶木有登场捏，您帖子里我改成jhu132llh了。
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10楼2011-04-11 14:05:24
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普通回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-11 12:13:10
不用十分之一也可。一般公司买的感受态100ul每管，使用时加入10ul连接质粒。

为了节省，我们经常用50ul，同样加入10ul质粒。效果没有可见的区别。
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2011-04-11 08:57:02
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天官赐福

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-04-11 09:14:05:
保证细胞过量时为了保证每一个质粒都能转进去细胞里
1.质粒毕竟要珍贵一点，细胞好养又好做；
2.其实质粒浓度高点也没事，但是转化效率差不多的；
3.试剂公司处于对自己的名声负责，假如你用50ul质粒和100ul质 ...

明白了，非常感谢！！！
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天之诱民，如埙如箎
4楼2011-04-11 10:30:39
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-11 12:13:32
1、最怕的是多个质粒进入同一个菌，这样就不是“单克隆”了
2、连接buffer中的盐成分可能会影响转化效率

至于其他的因素应该不用考虑太多
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5楼2011-04-11 10:31:00
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
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1949stone(EPI+1): 2011-04-11 12:12:34
西瓜:编辑内容 2011-04-11 14:01
看了楼上几位的，其实个人认为这个转化是看具体情况
1:一般感受态细胞呢，比如10b神马的自己做，转化的时候要看转什么东西进去了，转质粒（含重组的）少量，即2ul入50，60,70ul的感受态细胞均可以，如果是连接产物呢？可以多转化一些。。。5ul 6ul都行。
2：其实合适的比例对于转化效率的高低至关重要，还有就是电转化仪的电压，转化管都是有一定关系的。。
3：回复jhu132llh ：质粒其实要看什么质粒的，不过我觉得不太珍贵吧？几微升转化进大肠杆菌，提质粒可以提取很多的。。。。
4：回复ATP：有试过将多个质粒转化进一个感受态吗？怎么进行验证各种质粒是否已经成功转入呢？如果载体上带有抗性呢？怎么验证？

[ Last edited by 西瓜 on 2011-4-11 at 14:01 ]
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-04-11 11:39:09
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匿名

用户注销 (初入文坛)
★
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7楼2011-04-11 12:25:42
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3): good 2011-04-11 12:41:29
引用回帖:
Originally posted by 天官赐福 at 2011-04-11 08:32:17:
看各个生物试剂公司的感受态说明书上讲，转化的质粒体积不能超过感受态体积的十分之一，初不明缘由，查阅一番，有云“这样是保证感受态细胞过量”。
      既然是想让质粒进入感受太细胞中，为何不是让质粒过量呢 ...

关于质粒的转化体积原因有：
（1）如果加入质粒体积太大的话会影响感受态的的缓冲液的缓冲能力，从而影响感受态的转化效率
（2）我们知道经处理后的感受态细胞膜上产生了很多孔洞，当热激时吸附在细胞壁上的DNA会从孔洞进入细胞内，当质粒浓度太大后会阻塞孔洞，导致转化效率降低
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2011-04-11 12:37:24
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-04-11 14:02:46
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-11 11:39:09:
看了楼上几位的，其实个人认为这个转化是看具体情况
1:一般感受态细胞呢，比如10b神马的自己做，转化的时候要看转什么东西进去了，转质粒（含重组的）少量，即2ul入50，60,70ul的感受态细胞均可以，如果是连接产 ...

本科的课堂听说过~~自己因为不经常做克隆所以不知道~~可以做实验试试的
用两种抗性的质粒混在一起，高浓度转化涂到抗生素A的板，再挑克隆涂到抗生素B的板。不知道这个概率会有多高。
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9楼2011-04-11 13:17:36
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