24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1451  |  回复: 3

thestormcong

银虫 (小有名气)

[求助] red基因敲除转化子

小弟最近做了一轮电转化,转化子数量也还可以,20个左右,可是暂时挑取的转化子都是假阳性,pcr条带的大小跟野生株的一样,目的基因没有被置换。怀疑是不是转化的时候模板没有去除干净的原因。我用dpnI消化,再切胶回收。50ulpcr产物加1ul的酶和3ul的T buffer。请教各位有经验的虫子给点建议。还有在这些转化子里面,如果我接着挑,有没有可能挑到我想要的呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: , 鼓励应助 2012-03-30 11:17:48
thestormcong: 金币+8 2012-04-06 22:29:57
red同源重组的缺失方法中,带抗性的目的片段应该是从质粒上PCR得来的吧?最好能在PCR之前将质粒酶切线性化,而且将第一轮PCR的产物回收作为模板进行第二轮PCR,回收第二轮的产物电转进入待缺失的细菌,这样可以有效避免假阳性的出现
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
2楼2012-03-29 22:42:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

thestormcong

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2012-03-29 22:42:05:
red同源重组的缺失方法中,带抗性的目的片段应该是从质粒上PCR得来的吧?最好能在PCR之前将质粒酶切线性化,而且将第一轮PCR的产物回收作为模板进行第二轮PCR,回收第二轮的产物电转进入待缺失的细菌,这样可以有 ...

好的,谢谢建议。
3楼2012-03-29 22:53:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

thestormcong

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2012-03-29 22:42:05:
red同源重组的缺失方法中,带抗性的目的片段应该是从质粒上PCR得来的吧?最好能在PCR之前将质粒酶切线性化,而且将第一轮PCR的产物回收作为模板进行第二轮PCR,回收第二轮的产物电转进入待缺失的细菌,这样可以有 ...

我回收了第二轮的pcr产物,但是好像浓度不够(条带不亮),于是我将第二轮的pcr产物作为模板进行扩增,奇怪的是竟然没有能够扩增出来,不知道是什么情况,望求助!
4楼2012-04-06 22:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 thestormcong 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 320分人工智能调剂 +8 振—TZ 2026-04-03 8/400 2026-04-05 22:33 by 范式思维
[考研] 322求调剂 +3 嗯哼哼恒 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:52 by nepu_uu
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-04 4/200 2026-04-05 18:46 by imissbao
[考研] 材料0856 英一数二 323 求调剂 +14 袁sy 2026-04-01 14/700 2026-04-05 18:18 by cql1109
[考研] 290求调剂085701 +10 1314捧花 2026-04-02 10/500 2026-04-05 10:19 by Sealedwind
[考研] 材料科学与工程调剂 +19 深V宿舍吧 2026-03-30 20/1000 2026-04-04 22:13 by hemengdong
[考研] 材料专硕306英一数二 +8 z1z2z3879 2026-03-31 8/400 2026-04-04 22:08 by hemengdong
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-03-31 5/250 2026-04-04 19:45 by 1753564080
[考研] 0710生物学336分求调剂 +6 kiyy 2026-04-01 8/400 2026-04-04 10:10 by kiyy
[考研] 350一志愿北京航空航天大学08500材料科学与工程求调剂 +5 kjnasfss 2026-04-03 5/250 2026-04-03 22:29 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 机械专硕297 +3 Afksy 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:24 by 1753564080
[考研] 数一英一285求调剂 +7 AZMK 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:03 by ms629
[考研] 296求调剂 +4 sdhu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:29 by baoball
[考研] 293求调剂 +4 珂珂乐 2026-04-02 4/200 2026-04-02 20:10 by 6781022
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 09:52 by yulian1987
[考研] 292求调剂 +17 木虫er12138 2026-04-01 17/850 2026-04-01 21:37 by 七度不信任
[考研] 286求调剂 +5 Sa67890. 2026-04-01 7/350 2026-04-01 19:50 by 6781022
[考研] 复试调剂 +7 双马尾痞老板2 2026-03-31 7/350 2026-03-31 19:49 by Dyhoer
[考研] 340求调剂 +4 希望如此i 2026-03-31 4/200 2026-03-31 16:40 by 690616278
信息提示
请填处理意见