24小时热门版块排行榜    

查看: 1427  |  回复: 3

thestormcong

银虫 (小有名气)

[求助] red基因敲除转化子

小弟最近做了一轮电转化,转化子数量也还可以,20个左右,可是暂时挑取的转化子都是假阳性,pcr条带的大小跟野生株的一样,目的基因没有被置换。怀疑是不是转化的时候模板没有去除干净的原因。我用dpnI消化,再切胶回收。50ulpcr产物加1ul的酶和3ul的T buffer。请教各位有经验的虫子给点建议。还有在这些转化子里面,如果我接着挑,有没有可能挑到我想要的呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: , 鼓励应助 2012-03-30 11:17:48
thestormcong: 金币+8 2012-04-06 22:29:57
red同源重组的缺失方法中,带抗性的目的片段应该是从质粒上PCR得来的吧?最好能在PCR之前将质粒酶切线性化,而且将第一轮PCR的产物回收作为模板进行第二轮PCR,回收第二轮的产物电转进入待缺失的细菌,这样可以有效避免假阳性的出现
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
2楼2012-03-29 22:42:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

thestormcong

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2012-03-29 22:42:05:
red同源重组的缺失方法中,带抗性的目的片段应该是从质粒上PCR得来的吧?最好能在PCR之前将质粒酶切线性化,而且将第一轮PCR的产物回收作为模板进行第二轮PCR,回收第二轮的产物电转进入待缺失的细菌,这样可以有 ...

好的,谢谢建议。
3楼2012-03-29 22:53:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

thestormcong

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2012-03-29 22:42:05:
red同源重组的缺失方法中,带抗性的目的片段应该是从质粒上PCR得来的吧?最好能在PCR之前将质粒酶切线性化,而且将第一轮PCR的产物回收作为模板进行第二轮PCR,回收第二轮的产物电转进入待缺失的细菌,这样可以有 ...

我回收了第二轮的pcr产物,但是好像浓度不够(条带不亮),于是我将第二轮的pcr产物作为模板进行扩增,奇怪的是竟然没有能够扩增出来,不知道是什么情况,望求助!
4楼2012-04-06 22:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 thestormcong 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 344求调剂 +3 knight344 2026-03-16 3/150 2026-03-16 09:42 by 无际的草原
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +6 Ncdx123456 2026-03-13 7/350 2026-03-16 07:44 by L135790
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +7 秋有木北 2026-03-14 7/350 2026-03-15 17:30 by 小物理化学
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 一志愿山大 321分 求调剂 +7 每天散步 2026-03-09 8/400 2026-03-14 02:18 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +6 yfihxh 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:18 by JourneyLucky
[考研] 0703求调剂 +7 jtyq001 2026-03-10 7/350 2026-03-14 01:06 by JourneyLucky
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 321求调剂 +3 CUcat 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:25 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。,。,。,。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 08食品或轻工求调剂,本科发表3篇sci一区top论文,一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵, 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 一志愿江南大学085701环境工程专硕总分287求调剂 +5 18266118446 2026-03-09 5/250 2026-03-11 16:51 by 2020015
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
信息提示
请填处理意见