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天官赐福

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒的转化体积为什么不能超过感受态的十分之一 已有11人参与

看各个生物试剂公司的感受态说明书上讲,转化的质粒体积不能超过感受态体积的十分之一,初不明缘由,查阅一番,有云“这样是保证感受态细胞过量”。
      既然是想让质粒进入感受太细胞中,为何不是让质粒过量呢?
      小生最近在作酵母双杂交,对于加入的转化质粒的体积是否一如转化大肠杆菌那样?望各位大虾不吝赐教!!!
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天之诱民,如埙如箎
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-11 12:13:32
1、最怕的是多个质粒进入同一个菌,这样就不是“单克隆”了
2、连接buffer中的盐成分可能会影响转化效率

至于其他的因素应该不用考虑太多
5楼2011-04-11 10:31:00
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-11 12:13:10
不用十分之一也可。一般公司买的感受态100ul每管,使用时加入10ul连接质粒。

为了节省,我们经常用50ul,同样加入10ul质粒。效果没有可见的区别。
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
2楼2011-04-11 08:57:02
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+3): 鼓励 2011-04-11 12:13:20
保证细胞过量时为了保证每一个质粒都能转进去细胞里
1.质粒毕竟要珍贵一点,细胞好养又好做;
2.其实质粒浓度高点也没事,但是转化效率差不多的;
3.试剂公司处于对自己的名声负责,假如你用50ul质粒和100ul质粒同样的转化 ,都得到了100个克隆,那么你不觉得让你用50ul质粒做转化更能显示出试剂公司的试剂的NB之处嘛
4.质粒浓度太大了,容易让同一个细胞转化进多个质粒,对细胞本身是负担,回印务高死亡率的
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
3楼2011-04-11 09:14:05
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天官赐福

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-04-11 09:14:05:
保证细胞过量时为了保证每一个质粒都能转进去细胞里
1.质粒毕竟要珍贵一点,细胞好养又好做;
2.其实质粒浓度高点也没事,但是转化效率差不多的;
3.试剂公司处于对自己的名声负责,假如你用50ul质粒和100ul质 ...

明白了,非常感谢!!!
天之诱民,如埙如箎
4楼2011-04-11 10:30:39
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