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jzyzqbx

木虫 (小有名气)

[求助] 求助一个关于酿酒酵母转化的问题

最近在做DNA改组,想利用酿酒酵母作为表达载体,因为改组后的DNA需要筛选,需要建库,请问载体与目的基因连接后可以直接转化到酿酒酵母中进行筛选吗?如果可以,载体与目的基因加入连接酶连接过夜后,在转入酵母前需要做怎样的处理。怎样可以提高转化效率,用电转还是化转呢?
谢谢大家
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by jzyzqbx at 2012-02-16 10:18:32:
酿酒酵母的电转怎么做呀?

载体构建的步骤和大肠杆菌中质粒转化一样的,也是转大肠,等构建成功后提质粒电转化酵母,文献很多的,自己查查看就知道了。
6楼2012-02-16 13:20:26
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
16楼2012-02-20 15:35:18
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普通回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
电转比化转效率高这是肯定的。
2楼2012-02-16 07:54:08
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般酿酒酵母的表达载体都是穿梭载体,建库那一步为什么不在大肠杆菌里面做呢?肯定更容易操作一些。
Thank-you,so-blue.
3楼2012-02-16 09:17:49
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jzyzqbx

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by lxj341401 at 2012-02-16 07:54:08:
电转比化转效率高这是肯定的。

酿酒酵母的电转怎么做呀?
4楼2012-02-16 10:18:32
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jzyzqbx

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by susizheng at 2012-02-16 09:17:49:
一般酿酒酵母的表达载体都是穿梭载体,建库那一步为什么不在大肠杆菌里面做呢?肯定更容易操作一些。

先转大肠,再转酵母的话会不会工作量比较大呢?而且基因来源于真核,在大肠中不能表达。看过一篇文献是酵母建库的,不知可行否
5楼2012-02-16 10:22:48
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杜拉拉314159

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也在做酿酒酵母,用的EBY100,一直在做化学转化,还没有成功呢,最后是要用酵母表面展示,请问楼主是不是也要做这个?
自己选择的路,跪着也要走完!
7楼2012-02-16 15:54:45
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
8楼2012-02-16 17:19:28
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匿名

用户注销 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖仅楼主可见
9楼2012-02-16 17:25:33
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杜拉拉314159

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lmxu0917 at 2012-02-16 17:19:28:
你用的是PYD1载体?

是的,你也是么?
自己选择的路,跪着也要走完!
10楼2012-02-16 20:23:28
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